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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » HPLC 中药多组分含量测定
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良辰1314521

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC 中药多组分含量测定 已有1人参与

1、本人从该中药分离得到14个黄酮化合物，应用HPLC对该中药进行多组分含量测定。
供试品制备：提取方式采用加热回流
比较了加热回流提取和超声提取两种提取方式，发现，加热回流提取峰数较多，且峰面积较多；考察了甲醇水和乙醇水两种提取溶剂，结果显示甲醇水峰数较多；甲醇水提取溶剂的用量，1g药材经15ml、25ml和50ml溶剂提取，结果显示50ml，峰面积适中；考察甲醇水比例25%、50%、75%和100%甲醇水，结果显示75%甲醇水，峰数较多，峰面积较大。因此，暂时确定以1g药材经50ml75%甲醇水加热回流2h，制得供试品，以此供试品考察色谱条件。
但，我分得的化合物在该药材的HPLC色谱图中只找到了4个化合物，结果如图所示。
请教大家，还有什么解决办法
2、 其中第二个大峰拖尾，请教还有什么解决办法
流动相添加剂考察了磷酸和甲酸，浓度分别为0.1%磷酸水和0.1%甲酸水。0.1%磷酸水分离效果较0.1甲酸水好，但拖尾严重，1号峰拖尾达到1.5左右；0.1%甲酸水峰形较好，但1号峰分离度差。

HPLC 中药多组分含量测定
IMG_20160719_215147.jpg
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1楼 2016-07-19 22:02:41
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良辰1314521

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-07-20 07:56:18
一般解决拖尾问题，除了调节PH还可以试试加入缓冲盐，还可以考察缓冲盐的浓度

嗯嗯，因为我的都是黄酮类化合物，所以，我在考虑假磷酸二氢钾、磷酸里加三乙胺，还有其他的吗，多多介绍几个，谢谢啦
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3楼2016-07-20 10:59:40
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
良辰1314521: 金币+35, ★有帮助, 3 2016-07-20 10:57:59
一般解决拖尾问题，除了调节PH还可以试试加入缓冲盐，还可以考察缓冲盐的浓度

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2楼2016-07-20 07:56:18
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品，天然产物分离纯化
引用回帖:
3楼: Originally posted by 良辰1314521 at 2016-07-20 10:59:40
嗯嗯，因为我的都是黄酮类化合物，所以，我在考虑假磷酸二氢钾、磷酸里加三乙胺，还有其他的吗，多多介绍几个，谢谢啦...

用的比较多的就是，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，或者钠盐也可以，用磷酸调PH值，还有醋酸铵或者醋酸钠也比较常用，
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4楼2016-07-20 12:23:35
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zyb45612

新虫 (小有名气)
只有四个化合物出来，可能是因为化合物极性的原因，导致75%甲醇提取不全或者量太少，如果想所有化合物都能找到，建议更换提取溶剂，比如丙酮，或者加大提取药材的量，总而言之，需要不断尝试，祝一切顺利。
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5楼2016-07-21 10:48:38
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