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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 多糖分离纯化求助，DEAE-52
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

[求助] 多糖分离纯化求助，DEAE-52 已有2人参与

本人做多糖纯化，梯度洗脱，跑了四次，都不理想。求哪位分离纯化帮忙，求顺利毕业！！
现在把就具体的参数说明下：填料DEAE-52，柱子为2.6*40，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脱，多糖分子量是10万 Da左右。

讲实话，这些图我自己都看不下去了。实验的我做的真是没脾气，想请教哪位大神可以帮我分析下这些洗脱图。给点意见，到底是我参数没有设定好，还是柱子或者填料选择有问题？？

多糖分离纯化求助，DEAE-52
第一次，上样量100mg 流速：1ml/ml 每管1min 每个梯度跑80根管，但隔空测定，每个梯度40根管。


多糖分离纯化求助，DEAE-52-1
第二次，参数同第一次。第一次单是用缓冲液就直接全冲出来了，怀疑是柱子没填实，此次将柱子附加了填料，并压实。


多糖分离纯化求助，DEAE-52-2
第三次，参数同第一次。


多糖分离纯化求助，DEAE-52-3
第四次，总结前三次，怀疑是流速太大，低极性浓度时就全洗出了。这次将填料用酸碱和水处理，再生了下。参数调整为上样量为25mg, 0.5 ml/min 每个梯度收集20根管，没根管10min。依次测定
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1楼 2016-07-19 17:02:02
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莎莎0526

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 玉面女侠小菲 at 2016-07-25 22:14:55
我觉得可能是填料没有处理好。第一，再生后的填料要进行脱气，如果脱气不好会影响你洗脱的结果；第二，脱气后的填料在装柱的时候要进行引流，而且不能出现断层，在装柱过程中，要在柱子底部留1-2cm缓冲液，装柱过程 ...

想问一下，再生后填柱子为什么水层总是不澄清。我洗了两遍都没用。这样对上样有影响么？填柱填了好几天了都不知道咋回事
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9楼2016-08-15 21:34:12
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)
我们实验室，就我自己做多糖，所以基本都是自己在折腾这些东西。孤立求援啊！！
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2楼2016-07-19 17:04:04
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lpz598417258: 金币+2, ★有帮助 2016-07-20 18:07:17
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料，或者DEAE高流速琼脂糖凝胶，或者Q高流速琼脂糖凝胶。
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3楼2016-07-20 17:43:41
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-20 17:43:41
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料，或者DEAE高流速琼脂糖凝胶，或者Q高流速琼脂糖凝胶。

我想再试一下，DEAE-52这个填料蛮贵的。我想多尝试下，如果真不行，再考虑换填料。
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4楼2016-07-20 18:08:41
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