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载体构建，外源跟载体连不上 已有5人参与
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构的是一个表达载体，前面都很顺利，就是到最后一步连不上，而且板上一个菌落都不长，载体抗性是氯霉素抗性，四度，十六度过夜都试了就是连不上，酶切的图都很正常，求大神帮我看看是什么问题。 发自小木虫Android客户端 |
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6楼2016-07-16 10:20:48
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基本是外源载体3:1或者4:1的比例，酶切回收完测浓度很低，但是检测是有条带的，感受态实验室其他人用都没有问题，我已经开始怀疑自己做转化的水平了，另外想问下，氯霉素浓度过高也会出现不长的情况么？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-07-16 10:30:42
2楼2016-07-15 17:27:29
3楼2016-07-15 17:33:16
梅太奇阿拉干
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4楼2016-07-15 20:52:38
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-17 08:05:29
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楼主可以把酶连体系写出来，另外确定感受态细胞没事，氯霉素浓度没弄错，如果是商业表达载体，可以把表达载体名称写出来，也方便大家帮你分析问题。如果感受态细胞没问题，一个菌落，说明楼主载体切的还是挺干净的，不用担心载体自连了 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-07-15 21:21:09
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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抗生素浓度过高，有可能会不长，但一般用推荐的工作浓度都没问题。也有可能是转化的问题，可以让实验室其他人帮你电转一下。另外，如果外源和载体大小相差不是很大的话，可以考虑降低一下比例。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-07-16 10:39:52
四月无央
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9楼2016-07-16 10:41:35
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