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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 载体构建，外源跟载体连不上
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 赛克图 at 2016-07-16 10:20:48
片段是2700，载体大约一万多
...

插入片段有点大，本身就不太好连，操作应该是没有问题的，下次连接时，做个剃度连接，载体比目的片段1:1，1:2，1:3，1:4，1:10，然后将连接产物纯化到一管，进行转化

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11楼2016-07-16 11:04:34
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赛克图

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 四月无央 at 2016-07-16 10:39:52
抗生素浓度过高，有可能会不长，但一般用推荐的工作浓度都没问题。也有可能是转化的问题，可以让实验室其他人帮你电转一下。另外，如果外源和载体大小相差不是很大的话，可以考虑降低一下比例。
...

谢谢了，感觉实验好难

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12楼2016-07-16 12:56:34
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四月无央

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 赛克图 at 2016-07-16 12:56:34
谢谢了，感觉实验好难
...

呵呵，有些克隆是不好做，别气馁，实在做不出来，可以换组装的方法。

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13楼2016-07-16 14:52:14
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朱庆平

铜虫 (小有名气)
大片段不好连，我以前连接2kb的死活连不上，不知道有没有大神有什么窍门。

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14楼2016-07-17 12:25:16
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以用solution I链接体系试一下，连体体系设置载体：片段1：3到1：10做一下，16摄氏度三个小时足够了~一般都能连上的
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···
15楼2016-07-17 14:21:49
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

无缝克隆试过没有？

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16楼2016-07-19 14:30:23
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