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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 载体构建，外源跟载体连不上
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赛克图

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体构建，外源跟载体连不上 已有5人参与

构的是一个表达载体，前面都很顺利，就是到最后一步连不上，而且板上一个菌落都不长，载体抗性是氯霉素抗性，四度，十六度过夜都试了就是连不上，酶切的图都很正常，求大神帮我看看是什么问题。

载体构建，外源跟载体连不上


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1楼 2016-07-15 15:10:25
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四月无央

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 赛克图 at 2016-07-16 10:30:42
基本是外源载体3:1或者4:1的比例，酶切回收完测浓度很低，但是检测是有条带的，感受态实验室其他人用都没有问题，我已经开始怀疑自己做转化的水平了，另外想问下，氯霉素浓度过高也会出现不长的情况么？
...

抗生素浓度过高，有可能会不长，但一般用推荐的工作浓度都没问题。也有可能是转化的问题，可以让实验室其他人帮你电转一下。另外，如果外源和载体大小相差不是很大的话，可以考虑降低一下比例。

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8楼2016-07-16 10:39:52
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bloodwar

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-17 08:05:19
是不是载体对感受态有毒性，另外你的末端是平末端吗，或者的链接体系太小了
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2楼2016-07-15 17:27:29
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赛克图

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bloodwar at 2016-07-15 17:27:29
是不是载体对感受态有毒性，另外你的末端是平末端吗，或者的链接体系太小了

不是平末端，体系5ul,10ul的都试过。

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3楼2016-07-15 17:33:16
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
片段和载体分别多大？

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4楼2016-07-15 20:52:38
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