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lx910615

新虫 (小有名气)

[求助] western blot 求助,荧光猝灭的很快,请各位指点一二。 已有3人参与

求助,破碎菌体得胞内蛋白,做western,1抗(自制)1:2000 摇床1h,4℃过夜,TBST洗膜6次/10min, 二抗1:5000 1.5h,TBST洗膜3次/10min,TBS洗一次。碧云天ECL发光液1:1,荧光猝灭的很快,请各位指点一二。
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engreen2016

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

9楼2016-09-05 14:41:23
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

猝灭有两种,一种是膜上结合的HRP太多,导致底物快速耗尽,此时膜上会留下黄褐色条带的印迹,另一种是有ECL液体时在发光,吸掉后很快荧光消失,这种情况是有污染物存在,别问我具体是什么污染,我也不清楚

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2楼2016-07-14 17:45:55
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,再加上ECL结合时间过长,显影时间过长。总之先减少一抗量吧。
3楼2016-07-15 14:28:13
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lx910615

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 314300420 at 2016-07-14 17:45:55
猝灭有两种,一种是膜上结合的HRP太多,导致底物快速耗尽,此时膜上会留下黄褐色条带的印迹,另一种是有ECL液体时在发光,吸掉后很快荧光消失,这种情况是有污染物存在,别问我具体是什么污染,我也不清楚
...

谢谢

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4楼2016-07-16 12:40:04
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