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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：设计引物一对
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助：设计引物一对

因要用Real-Time做组织表达，要求引物的特异性很强，甚至二聚体都没有最好，

而本人，设计的引物，验证比较差，特请大家帮帮忙，先谢谢了！

引物设计要求：

1.PCR产物：200-250 bp

2.退火温度：55

序列如下：

5’至3‘

ACCATCCAGTGGACCATCATCATTAACATTTTGGTGTGGTTGGGCAGCTTCCTTCTGAGCATCCCGGTCATGATATATGCTAAAGTCATCTCCAAAAAGAACATGAACATATGTATGATTAACCTGGATGGGCCTCAGGATATGTACTGGTACACACTCTACCAGTCCATGCTGGGTTTCATCGTCCCCCTCATTATAATAAGCACATTTTACACTCTCACTCTGTACCACGTGTTCCGCTCCATCCGGCGGGTCAAACGCAAGCAGTCAGTGTGGGCCAAGCGGGCCACTAAGACAGTTGTGATGGTGATCGCCCTGTTCTTGGTCTGCTGGTCTCCCTATCATGTCATCCAGG
TGATCAACCTCAGCATCTGCCTG
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
1楼 2008-11-10 20:31:32
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白
★ ★ ★ ★ ★
nandaxq(金币+5,VIP+0):太感谢了！希望一举命中！
Sense       5>CAGTCCATGCTGGGTTTC>3    53     216bp
Anti-sense 5>CAGGCAGATGCTGAGGTT>3    59

Sense       5>TGGATGGGCCTCAGGATA>3     55    212bp
Anti-sense 5>GAACCAGCAGACCAAGAA>3      50

本人做了好多基因的real-time RT-PCR，引物的退火温度在52-60之间，均匀55度都能扩增，内参的退火温度正好也是55度！帮你设计了两条，一般出现一个峰值就可以用，你都合成吧，选择一个好点的！
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做有意义的事就是好好活着！
4楼2008-11-10 21:09:01
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白
恩，是要做定量PCR的引物吗？我帮你设，先占住，等会儿把引物发上来！
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做有意义的事就是好好活着！
2楼2008-11-10 20:36:48
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
恩，是的，做荧光定量用，由于上次自己设计的效果比较差，都被老板K了一顿，浪费他钱，还请多多帮忙，谢谢！
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
3楼2008-11-10 20:40:46
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
真是太感谢你啦，马上下订单，呵呵，希望可以一步到位，我的内参基因也是55度，

THANKS！
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引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
5楼2008-11-10 21:12:12
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