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nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助:设计引物一对

因要用Real-Time做组织表达,要求引物的特异性很强,甚至二聚体都没有最好,

而本人,设计的引物,验证比较差,特请大家帮帮忙,先谢谢了!

引物设计要求:

1.PCR产物:200-250 bp

2.退火温度:55

序列如下:

5’至3‘

ACCATCCAGTGGACCATCATCATTAACATTTTGGTGTGGTTGGGCAGCTTCCTTCTGAGCATCCCGGTCATGATATATGCTAAAGTCATCTCCAAAAAGAACATGAACATATGTATGATTAACCTGGATGGGCCTCAGGATATGTACTGGTACACACTCTACCAGTCCATGCTGGGTTTCATCGTCCCCCTCATTATAATAAGCACATTTTACACTCTCACTCTGTACCACGTGTTCCGCTCCATCCGGCGGGTCAAACGCAAGCAGTCAGTGTGGGCCAAGCGGGCCACTAAGACAGTTGTGATGGTGATCGCCCTGTTCTTGGTCTGCTGGTCTCCCTATCATGTCATCCAGG
TGATCAACCTCAGCATCTGCCTG
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引诱若够,女人无所谓正派;筹码若高,男人无所谓忠诚;骑着白马的唐僧;带着翅膀的鸟人。
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

恩,是的,做荧光定量用,由于上次自己设计的效果比较差,都被老板K了一顿,浪费他钱,还请多多帮忙,谢谢!
引诱若够,女人无所谓正派;筹码若高,男人无所谓忠诚;骑着白马的唐僧;带着翅膀的鸟人。
3楼2008-11-10 20:40:46
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白

恩,是要做定量PCR的引物吗?我帮你设,先占住,等会儿把引物发上来!
做有意义的事就是好好活着!
2楼2008-11-10 20:36:48
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白

★ ★ ★ ★ ★
nandaxq(金币+5,VIP+0):太感谢了!希望一举命中!
Sense       5>CAGTCCATGCTGGGTTTC>3    53     216bp
Anti-sense 5>CAGGCAGATGCTGAGGTT>3    59

Sense       5>TGGATGGGCCTCAGGATA>3     55    212bp
Anti-sense 5>GAACCAGCAGACCAAGAA>3      50

本人做了好多基因的real-time RT-PCR,引物的退火温度在52-60之间,均匀55度都能扩增,内参的退火温度正好也是55度!帮你设计了两条,一般出现一个峰值就可以用,你都合成吧,选择一个好点的!
做有意义的事就是好好活着!
4楼2008-11-10 21:09:01
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

真是太感谢你啦,马上下订单,呵呵,希望可以一步到位,我的内参基因也是55度,

THANKS!
引诱若够,女人无所谓正派;筹码若高,男人无所谓忠诚;骑着白马的唐僧;带着翅膀的鸟人。
5楼2008-11-10 21:12:12
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