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银虫 (小有名气)

[求助] DEAE纤维素纯化蛋白关于缓冲液和洗脱液已有5人参与

我想问下：
问题一：平衡DEAE纤维素柱子用什么缓冲剂平衡，我用的Ph=3.5甲酸-甲酸钠缓冲液平衡，可以吗？
问题二：洗脱液怎么配置

，是在缓冲液中加入NaCl吗？还是用不同浓度的NaCl进行洗脱？

1楼 2016-07-11 20:25:08

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铜虫 (正式写手)

根据文献大致了解你的蛋白的PI。如果不确定就做试管实验看看各个pH条件下DEAE纤维素对蛋白的吸附情况。做之前蛋白要用不同pH的缓冲液透析充分，DEAE纤维素用所对应的缓冲液平衡好。摇床缓慢摇晃过夜，看看溶液中蛋白吸附的情况。建议缓冲液浓度不要超过50 mM.

9楼2016-07-16 03:51:04

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