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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » DEAE纤维素纯化蛋白 关于缓冲液和洗脱液
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calendar7

银虫 (小有名气)

[求助] DEAE纤维素纯化蛋白 关于缓冲液和洗脱液 已有5人参与

我想问下：
问题一：平衡DEAE纤维素柱子用什么缓冲剂平衡，我用的Ph=3.5甲酸-甲酸钠缓冲液平衡，可以吗？
问题二：洗脱液怎么配置，是在缓冲液中加入NaCl吗？还是用不同浓度的NaCl进行洗脱？
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1楼 2016-07-11 20:25:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DEAE离子交换介质的使用PH范围是2-9,所以在这个PH范围缓冲液都可以，用多少的PH要跟军你的目标蛋白来确定，PH大于PI带负电荷，才能和DEAE静电力结合。洗脱缓冲液，用平衡缓冲液加不同浓度的氯化钠，拉梯度洗脱可以增加纯化倍数。祝顺利
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calendar7
5楼2016-07-12 11:40:26
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普通回帖

w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
calendar7(shenyingbin代发): 金币+2, 感谢应助 2016-10-12 18:53:25
DEAE纤维素是阴离子交换柱，我们一般用它来分离多糖，分离蛋白我们实验室都用阳离子交换柱，像羧甲基纤维素什么的。洗脱液是用缓冲液配制的。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

calendar7
苦难的日子终将逝去，但强者却永存
2楼2016-07-11 20:30:35
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calendar7

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by w911227 at 2016-07-11 20:30:35
DEAE纤维素是阴离子交换柱，我们一般用它来分离多糖，分离蛋白我们实验室都用阳离子交换柱，像羧甲基纤维素什么的。洗脱液是用缓冲液配制的。

谢谢，DEAE是可以纯化蛋白的，我想问下平衡柱子的缓冲液是怎样选择的，我做的实验稀里糊涂的，谢谢大神
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3楼2016-07-11 20:49:34
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w911227

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by calendar7 at 2016-07-11 20:49:34
谢谢，DEAE是可以纯化蛋白的，我想问下平衡柱子的缓冲液是怎样选择的，我做的实验稀里糊涂的，谢谢大神...

哦哦，你应该有参考相应的文献才选择的DEAE吧？我们一般都是根据文献来判断的，我们实验室用的是醋酸盐缓冲液
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苦难的日子终将逝去，但强者却永存
4楼2016-07-12 11:20:31
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是选用一个浓度吧，不同浓度的意义不大啊，
直接用配好的氯化钠溶液，比例参照文献
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6楼2016-07-12 14:57:08
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calendar7

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-12 11:40:26
DEAE离子交换介质的使用PH范围是2-9,所以在这个PH范围缓冲液都可以，用多少的PH要跟军你的目标蛋白来确定，PH大于PI带负电荷，才能和DEAE静电力结合。洗脱缓冲液，用平衡缓冲液加不同浓度的氯化钠，拉梯度洗脱可以增 ...

我的蛋白不纯，我想问下PI怎么测呢，等点聚焦吗？  不同浓度的氯化钠洗脱，通常用什么梯度呢？  非常感谢。
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7楼2016-07-12 23:04:12
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calendar7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by w911227 at 2016-07-12 11:20:31
哦哦，你应该有参考相应的文献才选择的DEAE吧？我们一般都是根据文献来判断的，我们实验室用的是醋酸盐缓冲液...

嗯 谢谢
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8楼2016-07-12 23:05:46
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

根据文献大致了解你的蛋白的PI。如果不确定就做试管实验看看各个pH条件下DEAE纤维素对蛋白的吸附情况。做之前蛋白要用不同pH的缓冲液透析充分，DEAE纤维素用所对应的缓冲液平衡好。摇床缓慢摇晃过夜，看看溶液中蛋白吸附的情况。建议缓冲液浓度不要超过50 mM.
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9楼2016-07-16 03:51:04
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单车sjq

铁虫 (小有名气)
楼主，你好，我现在也想用DEAE纤维素柱来纯化我的多糖产品，请问可以在哪里买到啊？谢谢

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10楼2016-07-20 23:57:08
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