应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » DEAE纤维素纯化蛋白 关于缓冲液和洗脱液
121/2返回列表12下一页
查看: 3754  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

calendar7

银虫 (小有名气)

[求助] DEAE纤维素纯化蛋白 关于缓冲液和洗脱液 已有5人参与

我想问下：
问题一：平衡DEAE纤维素柱子用什么缓冲剂平衡，我用的Ph=3.5甲酸-甲酸钠缓冲液平衡，可以吗？
问题二：洗脱液怎么配置，是在缓冲液中加入NaCl吗？还是用不同浓度的NaCl进行洗脱？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-11 20:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DEAE离子交换介质的使用PH范围是2-9,所以在这个PH范围缓冲液都可以，用多少的PH要跟军你的目标蛋白来确定，PH大于PI带负电荷，才能和DEAE静电力结合。洗脱缓冲液，用平衡缓冲液加不同浓度的氯化钠，拉梯度洗脱可以增加纯化倍数。祝顺利
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

calendar7
5楼2016-07-12 11:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
calendar7(shenyingbin代发): 金币+2, 感谢应助 2016-10-12 18:53:25
DEAE纤维素是阴离子交换柱，我们一般用它来分离多糖，分离蛋白我们实验室都用阳离子交换柱，像羧甲基纤维素什么的。洗脱液是用缓冲液配制的。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

calendar7
苦难的日子终将逝去，但强者却永存
2楼2016-07-11 20:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calendar7

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by w911227 at 2016-07-11 20:30:35
DEAE纤维素是阴离子交换柱，我们一般用它来分离多糖，分离蛋白我们实验室都用阳离子交换柱，像羧甲基纤维素什么的。洗脱液是用缓冲液配制的。

谢谢，DEAE是可以纯化蛋白的，我想问下平衡柱子的缓冲液是怎样选择的，我做的实验稀里糊涂的，谢谢大神
赞一下 回复此楼
3楼2016-07-11 20:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w911227

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by calendar7 at 2016-07-11 20:49:34
谢谢，DEAE是可以纯化蛋白的，我想问下平衡柱子的缓冲液是怎样选择的，我做的实验稀里糊涂的，谢谢大神...

哦哦，你应该有参考相应的文献才选择的DEAE吧？我们一般都是根据文献来判断的，我们实验室用的是醋酸盐缓冲液
赞一下 回复此楼
苦难的日子终将逝去，但强者却永存
4楼2016-07-12 11:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是选用一个浓度吧，不同浓度的意义不大啊，
直接用配好的氯化钠溶液，比例参照文献
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-12 14:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calendar7

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-12 11:40:26
DEAE离子交换介质的使用PH范围是2-9,所以在这个PH范围缓冲液都可以，用多少的PH要跟军你的目标蛋白来确定，PH大于PI带负电荷，才能和DEAE静电力结合。洗脱缓冲液，用平衡缓冲液加不同浓度的氯化钠，拉梯度洗脱可以增 ...

我的蛋白不纯，我想问下PI怎么测呢，等点聚焦吗？  不同浓度的氯化钠洗脱，通常用什么梯度呢？  非常感谢。
赞一下 回复此楼
7楼2016-07-12 23:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

calendar7

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by w911227 at 2016-07-12 11:20:31
哦哦，你应该有参考相应的文献才选择的DEAE吧？我们一般都是根据文献来判断的，我们实验室用的是醋酸盐缓冲液...

嗯 谢谢
回复此楼
8楼2016-07-12 23:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

根据文献大致了解你的蛋白的PI。如果不确定就做试管实验看看各个pH条件下DEAE纤维素对蛋白的吸附情况。做之前蛋白要用不同pH的缓冲液透析充分，DEAE纤维素用所对应的缓冲液平衡好。摇床缓慢摇晃过夜，看看溶液中蛋白吸附的情况。建议缓冲液浓度不要超过50 mM.
赞一下 回复此楼
9楼2016-07-16 03:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

单车sjq

铁虫 (小有名气)
楼主，你好，我现在也想用DEAE纤维素柱来纯化我的多糖产品，请问可以在哪里买到啊？谢谢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-20 23:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 calendar7 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭