应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 1576  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shigm1121

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切 已有3人参与

各位学友：我再用Kpn1和Sac1酶切我构建的载体pBI121—GFP,没有切到我的目标基因GFP，在此求助。
我用的体系是40μl
建立如下双酶切反应体系:
dH2O  14μl
10XL  buffer  4μl
质粒DNA      20μl
Kpn1       1μl
Sac1       1μl
(2)37℃保温  5h
(3)65℃保温   10  min灭活限制酶"
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-10 11:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18716248350

新虫 (小有名气)
首先考虑重组载体上是否9436

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-07-10 17:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18716248350

新虫 (小有名气)
还没写完，发错了，7486

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-07-10 17:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18716248350

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-11 06:59:11
哎呀，实在不好意思，这手机出问题了，首先考虑重组载体上是否连上了GFP，然后两个酶公用buffer有没选对，酶有没有过期，你质粒浓度多大的加了20ul，一般1ul酶切1ug质粒，然后过夜酶切效果会较好，如果要回收可以先用20ul小体系切开了再加大体积做回收

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-07-10 17:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋斗的勤快虫

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2016-07-11 00:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
质粒浓度有多少？两个限制酶是否在网上匹配过最适的buffer？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-11 00:52:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shigm1121: 金币+5, 酶切时间我给搞了5个小时 2016-07-12 08:33:36
1、酶、buffer是否合适
2、一般酶切2-3h足够，酶切太久会切散或者看不到目的条带
3、质粒的提取质量如何？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-07-11 10:28:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
选一个GFP基因上的酶切位点，选一个载体上的位点，双酶切，看看是否有目的带
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-11 17:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shigm1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-07-10 17:33:01
哎呀，实在不好意思，这手机出问题了，首先考虑重组载体上是否连上了GFP，然后两个酶公用buffer有没选对，酶有没有过期，你质粒浓度多大的加了20ul，一般1ul酶切1ug质粒，然后过夜酶切效果会较好，如果要回收可以先 ...

亲：请问“用20ul小体系切开了再加大体积做回收”这个怎么做啊
赞一下 回复此楼
9楼2016-07-12 08:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shigm1121 at 2016-07-12 08:12:41
亲：请问“用20ul小体系切开了再加大体积做回收”这个怎么做啊...

就是先做一管20ul体系的把酶切体系时间这些条件摸好，然后同时做5管酶切，纯化或者胶回收时全部吸附到一个柱子上。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-12 09:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shigm1121 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 334求调剂 +3 曾仰之 2026-04-03 3/150 2026-04-03 09:49 by 遗忘消失的灆
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 3/150 2026-04-02 21:30 by jing_jenna
[考研] 找调剂 +6 楚乔乔 2026-04-01 6/300 2026-04-02 12:06 by xiaoranmu
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 311求调剂 +16 zchqwer 2026-04-01 18/900 2026-04-02 10:15 by 不吃魚的貓
[考研] 302求调剂一志愿北航070300，本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 化学工程专硕324分，一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 08工科275分求调剂 +13 AaAa7420 2026-03-31 13/650 2026-04-02 06:19 by 286640313
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-01 21:48 by chyhaha
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +6 lmnlzy 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:02 by 逆水乘风
[考研] 375求调剂 +7 雨夏整夜 2026-03-29 7/350 2026-03-31 18:52 by xhai2011
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 一志愿双一流机械285分求调剂 +4 幸运的三木 2026-03-29 5/250 2026-03-29 14:49 by Miko19
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭