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质粒酶切 已有3人参与
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各位学友：我再用Kpn1和Sac1酶切我构建的载体pBI121—GFP,没有切到我的目标基因GFP，在此求助。 我用的体系是40μl 建立如下双酶切反应体系: dH2O 14μl 10XL buffer 4μl 质粒DNA 20μl Kpn1 1μl Sac1 1μl (2)37℃保温 5h (3)65℃保温 10 min灭活限制酶" |
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2楼2016-07-10 17:28:39
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3楼2016-07-10 17:29:00
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-11 06:59:11
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-11 06:59:11
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哎呀，实在不好意思，这手机出问题了，首先考虑重组载体上是否连上了GFP，然后两个酶公用buffer有没选对，酶有没有过期，你质粒浓度多大的加了20ul，一般1ul酶切1ug质粒，然后过夜酶切效果会较好，如果要回收可以先用20ul小体系切开了再加大体积做回收 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-07-10 17:33:01
感谢参与，应助指数 +1
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5楼2016-07-11 00:27:01
凯伦爱佳佳
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