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huadsh

铜虫 (小有名气)

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[交流] 做菌种培养的请进

β-内酰胺酶的制备方法：
将产酶菌（什么菌种？哪里可以购买？）在平皿上画出单个菌落，挑取2-3个菌落（什么单位？）接种于25ml营养肉汤（如何配置？）中，37℃恒温摇床培养18h后，取2ml菌液转种于200ml营养肉汤（是否和前述一样？）中，37℃，150r/min恒温摇床培养6h。
上述200ml营养肉汤培养液，6500r/min，4℃离心15min，弃去上清液，沉淀物用0.1MpH7.2磷酸盐缓冲液冲洗2遍，将沉淀物悬浮（如何悬浮？是否加入调节比重的物质？）于适量0.01M pH7.0磷酸盐缓冲液，在冰浴条件下用MSE超声破碎仪将菌体破碎。破碎后菌液用低温超速离心机离心，21000r/min，4℃，1h。上清液即为β-内酰胺酶提取液（其储存温度、保质时间？）。
方法摘自信阳农校学报的一篇论文：β-内酰胺酶的研究进展
方法是否可行请鉴定一下。请回答一下问题。
如果有更简便的方法，传授一下。

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1楼 2008-11-08 20:28:14

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3499liu

木虫 (著名写手)

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将产酶菌（金黄色葡萄球菌，链球菌）在平皿上画出单个菌落，挑取2-3个菌落（最好只挑一个菌落）接种于25ml营养肉汤（现在都是成品，按照说明书配制；到百度搜索也可以！）中，37℃恒温摇床培养18h后，取2ml菌液转种于200ml营养肉汤（和前述一样）中，37℃，150r/min恒温摇床培养6h。
上述200ml营养肉汤培养液，6500r/min，4℃离心15min，弃去上清液，沉淀物用0.1MpH7.2磷酸盐缓冲液冲洗2遍，将沉淀物悬浮（用吸管或移液枪反复吹吸，不必加入调节比重的物质）于适量0.01M pH7.0磷酸盐缓冲液，在冰浴条件下用MSE超声破碎仪将菌体破碎。破碎后菌液用低温超速离心机离心，21000r/min，4℃，1h。上清液即为β-内酰胺酶提取液（4℃就可以，-20℃保存期更长）。