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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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huadsh

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] 做菌种培养的请进

β-内酰胺酶的制备方法:
     将产酶菌(什么菌种?哪里可以购买?)在平皿上画出单个菌落,挑取2-3个菌落(什么单位?)接种于25ml营养肉汤(如何配置?)中,37℃恒温摇床培养18h后,取2ml菌液转种于200ml营养肉汤(是否和前述一样?)中,37℃,150r/min恒温摇床培养6h。
上述200ml营养肉汤培养液,6500r/min,4℃离心15min,弃去上清液,沉淀物用0.1MpH7.2磷酸盐缓冲液冲洗2遍,将沉淀物悬浮(如何悬浮?是否加入调节比重的物质?)于适量0.01M pH7.0磷酸盐缓冲液,在冰浴条件下用MSE超声破碎仪将菌体破碎。破碎后菌液用低温超速离心机离心,21000r/min,4℃,1h。上清液即为β-内酰胺酶提取液(其储存温度、保质时间?)。
方法摘自信阳农校学报的一篇论文:β-内酰胺酶的研究进展
方法是否可行请鉴定一下。请回答一下问题。
如果有更简便的方法,传授一下。
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3499liu

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★
jiangy0122(金币+2,VIP+0):鼓励新虫应助
将产酶菌(金黄色葡萄球菌,链球菌)在平皿上画出单个菌落,挑取2-3个菌落(最好只挑一个菌落)接种于25ml营养肉汤(现在都是成品,按照说明书配制;到百度搜索也可以!)中,37℃恒温摇床培养18h后,取2ml菌液转种于200ml营养肉汤(和前述一样)中,37℃,150r/min恒温摇床培养6h。
上述200ml营养肉汤培养液,6500r/min,4℃离心15min,弃去上清液,沉淀物用0.1MpH7.2磷酸盐缓冲液冲洗2遍,将沉淀物悬浮(用吸管或移液枪反复吹吸,不必加入调节比重的物质)于适量0.01M pH7.0磷酸盐缓冲液,在冰浴条件下用MSE超声破碎仪将菌体破碎。破碎后菌液用低温超速离心机离心,21000r/min,4℃,1h。上清液即为β-内酰胺酶提取液(4℃就可以,-20℃保存期更长)。
专心做事,踏实做人!
3楼2008-12-10 17:42:55
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吴响儒

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

用金黄色葡萄球菌,链霉菌都行,可以去医学院校微免实验室接种。
2楼2008-12-02 09:03:09
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fzbxxw

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

上面这个答案可以了。
楼主是要验证文献?国内的文献最好少验证,俺曾经验证了一些基因工程类的,基本没成。所以后来全看国外文献喽。
4楼2008-12-10 18:13:42
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hampc

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

不明白,有现成的试剂可买,为何要这么麻烦?有研究的价值吗?
5楼2009-01-28 21:37:39
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