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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒导入受体细胞后提质粒结果是这样的，帮忙分析一下。。。
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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒导入受体细胞后提质粒结果是这样的，帮忙分析一下。。。 已有3人参与

如图，我的PCR产物长1574，加A尾，和T载体(长2692)连接，然后导入DH5α，挑了5个白斑，培养以后再提取质粒，跑琼脂糖凝胶电泳得到这样的结果，，，

重组质粒导入受体细胞后提质粒结果是这样的，帮忙分析一下。。。
P1011271.JPG
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1楼 2016-07-02 16:39:12
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎回帖交流 2016-07-03 08:40:16
小李纸11: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-07-04 14:08:31
做质粒酶切了没有？如果不做酶切的话，质粒跑出来的条带可能有多样，即使是同一个质粒，也可能不同。这是由于质粒不同的拓扑结构决定了。建议1）做酶切，这个一般比较可靠；2）做特异性PCR，能扩出目的条带，就证明可能是正确的。
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一品黄山
4楼2016-07-03 08:37:51
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
第3个样品连上了，提的质粒是超螺旋的，所以对比marker分子量会比预期小，你做个酶切然后再跑胶就知道了，其他都是空载体，可以扔了。

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7楼2016-07-04 18:39:31
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六六六六六

新虫 (小有名气)
质粒是超螺旋跑的快，酶切后再跑才能验证，跑质粒只需要和原始质粒对照就可以了

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11楼2016-07-06 07:50:12
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

第3、5个做酶切鉴定，选一个载体上的位点、选一个基因里的位点，双切跑胶看大小。
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12楼2016-07-06 15:37:05
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普通回帖

小李纸11

银虫 (正式写手)
Marker从上往下数第4,5,6,条分别是3472,2690,1882,1489。。。
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2楼2016-07-02 16:42:42
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sayen

银虫 (小有名气)
上面三条marker是多大

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3楼2016-07-03 00:59:49
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小李纸11

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sayen at 2016-07-03 00:59:49
上面三条marker是多大

Marker从上往下数第4,5,6,条分别是3472,2690,1882,1489。。。
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5楼2016-07-04 14:08:09
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Endemon

新虫 (初入文坛)
l好，h?h?ha，当我们心 噗，

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6楼2016-07-04 15:34:23
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ASWDR

金虫 (小有名气)
做个菌落PCR，再看结果

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8楼2016-07-05 08:08:41
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小李纸11

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 原来，是这样 at 2016-07-04 18:39:31
第3个样品连上了，提的质粒是超螺旋的，所以对比marker分子量会比预期小，你做个酶切然后再跑胶就知道了，其他都是空载体，可以扔了。

嗯嗯，我是用的这个做酶切的。

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9楼2016-07-05 10:24:16
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陈硕

铜虫 (正式写手)
菌液PCR

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10楼2016-07-06 01:27:04
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