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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒导入受体细胞后提质粒结果是这样的,帮忙分析一下。。。 已有3人参与

如图,我的PCR产物长1574,加A尾,和T载体(长2692)连接,然后导入DH5α,挑了5个白斑,培养以后再提取质粒,跑琼脂糖凝胶电泳得到这样的结果,,,

重组质粒导入受体细胞后提质粒结果是这样的,帮忙分析一下。。。
P1011271.JPG
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎回帖交流 2016-07-03 08:40:16
小李纸11: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-07-04 14:08:31
做质粒酶切了没有?如果不做酶切的话,质粒跑出来的条带可能有多样,即使是同一个质粒,也可能不同。这是由于质粒不同的拓扑结构决定了。建议1)做酶切,这个一般比较可靠;2)做特异性PCR,能扩出目的条带,就证明可能是正确的。
一品黄山
4楼2016-07-03 08:37:51
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

第3个样品连上了,提的质粒是超螺旋的,所以对比marker分子量会比预期小,你做个酶切然后再跑胶就知道了,其他都是空载体,可以扔了。

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7楼2016-07-04 18:39:31
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六六六六六

新虫 (小有名气)

质粒是超螺旋跑的快,酶切后再跑才能验证,跑质粒只需要和原始质粒对照就可以了

发自小木虫Android客户端
11楼2016-07-06 07:50:12
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

第3、5个做酶切鉴定,选一个载体上的位点、选一个基因里的位点,双切跑胶看大小。
12楼2016-07-06 15:37:05
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普通回帖

小李纸11

银虫 (正式写手)

Marker从上往下数第4,5,6,条分别是3472,2690,1882,1489。。。
2楼2016-07-02 16:42:42
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sayen

银虫 (小有名气)

3楼2016-07-03 00:59:49
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sayen at 2016-07-03 00:59:49
上面三条marker是多大

Marker从上往下数第4,5,6,条分别是3472,2690,1882,1489。。。
5楼2016-07-04 14:08:09
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Endemon

新虫 (初入文坛)

l好,h?h?ha,当我们心 噗,

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-07-04 15:34:23
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ASWDR

金虫 (小有名气)

8楼2016-07-05 08:08:41
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2016-07-04 18:39:31
第3个样品连上了,提的质粒是超螺旋的,所以对比marker分子量会比预期小,你做个酶切然后再跑胶就知道了,其他都是空载体,可以扔了。

嗯嗯,我是用的这个做酶切的。

发自小木虫Android客户端
9楼2016-07-05 10:24:16
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陈硕

铜虫 (正式写手)

10楼2016-07-06 01:27:04
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