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zxx8820

新虫 (小有名气)

[求助] 最近在做木醋杆菌的相关试验,可是做电转涂板抗性板上都不长,难...

最近在做木醋杆菌的相关试验,可是做电转涂板抗性板上都不长,难道是我感受态的问题还是电转条件的问题?可是是按照文献上写的做的啊。有没有做这个方面的,给提个建议啊,谢谢啦 @biostar2009

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51mimi

新虫 (小有名气)

电传对宿主有很大损伤,做之前所有东西要放在冰上,准备最适温度的培养基,转化完以后立即加入培养基恢复

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2楼2016-07-03 11:18:07
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51mimi

新虫 (小有名气)

感受太不能用自己化学离子如氯化钙制备的

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3楼2016-07-03 11:20:06
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zxx8820

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 51mimi at 2016-07-03 11:18:07
电传对宿主有很大损伤,做之前所有东西要放在冰上,准备最适温度的培养基,转化完以后立即加入培养基恢复

是这样操作的,复苏的时候也长了,可是在涂抗性板的时候,只有无抗板长,所有的抗性板都不长,难得是因为质粒没转进去吗?还是说这个质粒在我的菌中不表达呢?

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4楼2016-07-04 09:16:13
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51mimi

新虫 (小有名气)

抗性对吗,浓度可以用下合理范围内的梯度

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5楼2016-07-04 12:34:44
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zxx8820

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 51mimi at 2016-07-04 12:34:44
抗性对吗,浓度可以用下合理范围内的梯度

只要是有抗性的就长不了,难道是没转不进去吗?那有什么方法可以转进去啊?

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6楼2016-07-04 15:45:57
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51mimi

新虫 (小有名气)

7楼2016-07-05 06:59:22
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51mimi

新虫 (小有名气)

复苏的时候,用复苏培养基不加抗性,涂板才加。不知道你感受态怎么来的,如果是买的一般都有配套质粒做电转阳性对照,电极杯也有相应规格型号要根据宿主情况选择

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8楼2016-07-05 07:10:08
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zxx8820

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 51mimi at 2016-07-05 07:10:08
复苏的时候,用复苏培养基不加抗性,涂板才加。不知道你感受态怎么来的,如果是买的一般都有配套质粒做电转阳性对照,电极杯也有相应规格型号要根据宿主情况选择

嗯,是的,复苏的时候没有加抗性。感受态是我按照文献自己做的,难道是感受态的原因??

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9楼2016-07-05 15:26:26
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51mimi

新虫 (小有名气)

第一次给你回复就说过,不能用氯化钙等可以带离子进去的方法制备,对电击有影响

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10楼2016-07-05 16:17:33
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