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yml11

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒提取 已有6人参与

各位大神们,小妹请教一个问题。我从DH5a中提重组质粒pET-32a-目的片段,一直都提不出来呀,用的是天根的小质粒提取试剂盒来做的。请问是什么原因,该怎么办呢?

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yml11

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2016-07-01 19:48:46
你的试剂盒有没有问题啊?可以做个对照,换种质粒提一下。还有就是,你的DH5α确定含有质粒吗?会不会是假阳性?再者就是你确定你操作没问题吗?很多小细节都会影响提取效率。还有就是你怎么确定你的质粒没有提取出 ...

试剂盒应该没问题,之前提原始的质粒都能提出来的。现在就是在想是不是假阳性呢,送公司测序也说测不出来

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4楼2016-07-02 17:30:35
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-02 07:06:59
你的试剂盒有没有问题啊?可以做个对照,换种质粒提一下。还有就是,你的DH5α确定含有质粒吗?会不会是假阳性?再者就是你确定你操作没问题吗?很多小细节都会影响提取效率。还有就是你怎么确定你的质粒没有提取出来的?是测浓度还是跑胶验证?

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2楼2016-07-01 19:48:46
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MMCCBB

新虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-03 22:29:43
重组质粒第一步需要鉴定出正确克隆,然后过夜培养提质粒,你提质粒的菌液OD值应该为2——4。另外你现在选的感受态转化效率没有全是金的T1转化效率高,不行可以换它

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3楼2016-07-02 07:44:38
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yml11

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by MMCCBB at 2016-07-02 07:44:38
重组质粒第一步需要鉴定出正确克隆,然后过夜培养提质粒,你提质粒的菌液OD值应该为2——4。另外你现在选的感受态转化效率没有全是金的T1转化效率高,不行可以换它

因为我的片段只有110bp,所以选个低拷贝的质粒来做的。

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5楼2016-07-02 17:31:30
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