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零星风前絮

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒扩增 已有2人参与

老师给了我一点以前从国外带回来的质粒,让我转化扩增一下然后再测序。但是现在的情况是老师也不记得是什么载体,没有抗性的话摇起来的菌能用么?那个质粒还很少,不敢乱用啊……求助,谢谢各位!!

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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:32:09
各涂一个氨苄和卡那的板不就知道抗性了吗,用那个长菌的摇菌,然后提了质粒去测序,如果只是空载体那就搜一下质粒库就好,如果连了别的基因,那就在NCBI上blast一下看看呗

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耻与众草之为伍,何亭亭而独芳!何不为人之所赏兮,深山穷谷委严霜。
2楼2016-06-30 15:55:44
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:32:40
xn8008: 应助指数+1 2016-07-01 08:51:34
如果不知道抗性,可能转化都有问题吧。质粒的抗性基因太多了,不同意楼上说的只尝试氨苄和卡纳,还有红霉素氯霉素新霉素博来霉素……最起码你老师得给出一点点信息吧,不然那么多种质粒,真核的原核的穿梭质粒,到底从哪入手。不懂,坐等高手。
3楼2016-07-01 06:30:00
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零星风前絮

银虫 (小有名气)

谢谢楼上两位~师兄说让我先涂氨苄卡那试试,坐等长菌

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4楼2016-07-01 07:48:31
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

既然可以转化测序,那么还是大概知道一些质粒信息的,不然你的质粒用什么引物测序呢?另外可以拿氨苄和卡那的引物先做个pcr验证,看是否携带这些抗性基因。

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
5楼2016-07-04 18:03:24
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jackyoung

新虫 (正式写手)

可以转化后先用低浓度的筛一筛,搞出来以后用t7/sp6/m13等通用引物测一个反应,后续就能慢慢搞清楚了。

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CestLaVie
6楼2016-07-05 08:27:57
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