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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 质粒扩增
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零星风前絮

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒扩增 已有2人参与

老师给了我一点以前从国外带回来的质粒，让我转化扩增一下然后再测序。但是现在的情况是老师也不记得是什么载体，没有抗性的话摇起来的菌能用么？那个质粒还很少，不敢乱用啊……求助，谢谢各位！！

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1楼 2016-06-30 13:11:12
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976592787

木虫 (正式写手)

国家自然科学基金委员会委员长
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:32:09
各涂一个氨苄和卡那的板不就知道抗性了吗，用那个长菌的摇菌，然后提了质粒去测序，如果只是空载体那就搜一下质粒库就好，如果连了别的基因，那就在NCBI上blast一下看看呗

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耻与众草之为伍，何亭亭而独芳！何不为人之所赏兮，深山穷谷委严霜。
2楼2016-06-30 15:55:44
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-01 07:32:40
xn8008: 应助指数+1 2016-07-01 08:51:34
如果不知道抗性，可能转化都有问题吧。质粒的抗性基因太多了，不同意楼上说的只尝试氨苄和卡纳，还有红霉素氯霉素新霉素博来霉素……最起码你老师得给出一点点信息吧，不然那么多种质粒，真核的原核的穿梭质粒，到底从哪入手。不懂，坐等高手。
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3楼2016-07-01 06:30:00
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零星风前絮

银虫 (小有名气)
谢谢楼上两位～师兄说让我先涂氨苄卡那试试，坐等长菌

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4楼2016-07-01 07:48:31
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

既然可以转化测序，那么还是大概知道一些质粒信息的，不然你的质粒用什么引物测序呢？另外可以拿氨苄和卡那的引物先做个pcr验证，看是否携带这些抗性基因。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2016-07-04 18:03:24
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jackyoung

新虫 (正式写手)
可以转化后先用低浓度的筛一筛，搞出来以后用t7/sp6/m13等通用引物测一个反应，后续就能慢慢搞清楚了。

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CestLaVie
6楼2016-07-05 08:27:57
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