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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于移码突变的解决办法
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gstracy

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于移码突变的解决办法 已有4人参与

插入目的基因到表达载体时，只考虑到碱基是3的倍数就不会产生移码突变，克隆完成发现GFP不表达，回过头才发现还是移码突变了。
请问在现有的突变基础上，能否在目的基因和GFP之间插入linker（5个甘氨酸再加一个碱基）来解决移码突变的问题？
很着急，涉及到毕业

关于移码突变的解决办法
IMG_6723.JPG
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1楼 2016-06-27 15:07:37
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再见江湖

铁虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 再见江湖 at 2016-06-30 21:58:25
用snapgene测吧，很方便。

把原载体序列用snapgene打开，再把你的序列打开，两端加引物生成带酶切位点的片段，按软件进行电子酶切连入载体，是否移码一目了然。

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8楼2016-06-30 22:10:57
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
★
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可以的，也可以设计引物，重新PCR，酶切酶连就可以了
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2楼2016-06-27 15:42:36
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gstracy

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by viki_MDK at 2016-06-27 15:42:36
可以的，也可以设计引物，重新PCR，酶切酶连就可以了

我想把目的基因切下来，设计下游引物时，在酶切位点前加5个甘氨酸和1个碱基，我担心加的这1个碱基会影响融合蛋白的表达
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3楼2016-06-27 16:41:39
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
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xn8008: 应助指数+1 2016-06-30 22:31:24
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3楼: Originally posted by gstracy at 2016-06-27 16:41:39
我想把目的基因切下来，设计下游引物时，在酶切位点前加5个甘氨酸和1个碱基，我担心加的这1个碱基会影响融合蛋白的表达...

不需要切下来，，直接拿你的质粒，设计好引物，PCR后就是你要的产物，再链接就可以了
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4楼2016-06-27 17:10:13
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by gstracy at 2016-06-27 16:41:39
我想把目的基因切下来，设计下游引物时，在酶切位点前加5个甘氨酸和1个碱基，我担心加的这1个碱基会影响融合蛋白的表达...

可以的，但是这样也很麻烦呢，为什么不从新设计引物PCR，也很快。

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A right way maybe not a good way！
5楼2016-06-28 13:16:00
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gstracy

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 我爱chi辣椒 at 2016-06-28 13:16:00
可以的，但是这样也很麻烦呢，为什么不从新设计引物PCR，也很快。
...

重新克隆目的基因和GFP，需要2步才能得到这个质粒。
我这样替换掉目的基因就只需要1步，GFP保留在上面。
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6楼2016-06-29 20:31:07
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再见江湖

铁虫 (小有名气)
★
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用snapgene测吧，很方便。

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7楼2016-06-30 21:58:25
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 再见江湖 at 2016-06-30 22:10:57
把原载体序列用snapgene打开，再把你的序列打开，两端加引物生成带酶切位点的片段，按软件进行电子酶切连入载体，是否移码一目了然。
...

好的，谢谢你，准备一试。
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9楼2016-06-30 23:10:55
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51mimi

新虫 (小有名气)
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买个试剂盒一步到位……

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10楼2016-07-08 00:43:23
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