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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 构建好的载体，滴在滤纸上，四度能保存多久啊？
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panyax

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建好的载体，滴在滤纸上，四度能保存多久啊？ 已有1人参与

老师去年八月份从国外带回来的质粒，质粒是滴在滤纸上保存的，拿回来之后一直放在四度冰箱里。最近老师给我，要我把质粒转化出来，或者PCR把目的片段扩增出来。

但是转化之后，板子上不长菌。

pcr电泳得到的条带很暗。怎么都扩增不亮。是不是这个质粒已经不能用了啊？
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1楼 2016-06-27 10:50:49
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
1) 剪碎滴液体区域，扔到ep管里，溶解在TE or ddH2O里，静置一段时间
2) 离心取出所有上清
3) *optional 浓缩液体
4) 转化高效率感受态，保证10^8的效率
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Let God do with it as He wills
7楼2016-06-28 16:59:08
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普通回帖

panyax

新虫 (初入文坛)
不要沉，求助啊
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2楼2016-06-27 11:30:37
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慢慢的路过

铜虫 (初入文坛)
这个不应该拿回来就处理的吗？

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3楼2016-06-27 12:18:55
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panyax

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 慢慢的路过 at 2016-06-27 12:18:55
这个不应该拿回来就处理的吗？

老师开始给另一个同学在做，他做不出来，最近才给我的。。。
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4楼2016-06-27 17:03:06
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1205vivia

银虫 (小有名气)
换个菌株试试

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5楼2016-06-27 23:59:36
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panyax

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1205vivia at 2016-06-27 23:59:36
换个菌株试试

我的载体是常用的1300s，有什么好的建议吗？目前用过DH5α和gold
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6楼2016-06-28 16:03:46
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werq63

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-28 16:59:08
1) 剪碎滴液体区域，扔到ep管里，溶解在TE or ddH2O里，静置一段时间
2) 离心取出所有上清
3) *optional 浓缩液体
4) 转化高效率感受态，保证10^8的效率

加入TE之后搅碎，离心，取上清转化，你这个可以取10ul，确定好抗性

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8楼2016-06-28 23:20:28
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sayen

银虫 (小有名气)
估计悬，4度放了快一年，还是滤纸上

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9楼2016-06-28 23:26:24
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panyax

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-28 16:59:08
1) 剪碎滴液体区域，扔到ep管里，溶解在TE or ddH2O里，静置一段时间
2) 离心取出所有上清
3) *optional 浓缩液体
4) 转化高效率感受态，保证10^8的效率

用DH5α转化了，也尝试过用电转化，但是碰到了板子只长一个菌，然后基本都能摇出来，但就是抽不出质粒，或者说浓度很低。。。。
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10楼2016-06-29 09:03:22
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