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关于DNA连金实验操作 已有1人参与
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各位，虫友，最近花了近50几天，用DNA连金一直出问题老连不上。所以想咨询各位虫友意见！ 我目标是在金表面连上一个双链DNA，其中一条一端连金，另一条在远离金一端标记荧光基团，所以如果连上就有荧光 我的实验步骤：首先将50uL 10uMDNA用5uL 10mMTCEP活化2小时，然后将其和1mL金胶一同加入NaOH处理过的玻璃瓶中，然后在避光的条件下在摇床上摇晃16h，温度37℃，然后，向反应瓶中加入0.1M PB、0.1%SDS使其浓度达到0.01M PB、0.01%SDS。然后，隔2h逐滴加入2M NaCl溶液时玻璃瓶中NaCl浓度达到0.05M，然后，每隔6-8h滴加2M NaCl溶液，使NaCl浓度达到0.1M、0.2M、0.3M. 然后在8500转（离心力在5500g）下离心25min，然后用0.3M NaCl的0.01M PB进行洗涤，重复三次，最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解，然后和目标链在70度下保持10min中，然后缓慢将至室温，然后静置12h。最后8500转（离心力在5500g）下离心25min，最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解。然后用荧光测定，发现荧光量很小。所以，几乎链接DNA很少。 求问：这问题出在哪里？@崇明先生@jiagle |
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