| 查看: 1283 | 回复: 9 | |||
[求助]
关于DNA连金实验操作 已有1人参与
|
|
各位，虫友，最近花了近50几天，用DNA连金一直出问题老连不上。所以想咨询各位虫友意见！ 我目标是在金表面连上一个双链DNA，其中一条一端连金，另一条在远离金一端标记荧光基团，所以如果连上就有荧光 我的实验步骤：首先将50uL 10uMDNA用5uL 10mMTCEP活化2小时，然后将其和1mL金胶一同加入NaOH处理过的玻璃瓶中，然后在避光的条件下在摇床上摇晃16h，温度37℃，然后，向反应瓶中加入0.1M PB、0.1%SDS使其浓度达到0.01M PB、0.01%SDS。然后，隔2h逐滴加入2M NaCl溶液时玻璃瓶中NaCl浓度达到0.05M，然后，每隔6-8h滴加2M NaCl溶液，使NaCl浓度达到0.1M、0.2M、0.3M. 然后在8500转（离心力在5500g）下离心25min，然后用0.3M NaCl的0.01M PB进行洗涤，重复三次，最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解，然后和目标链在70度下保持10min中，然后缓慢将至室温，然后静置12h。最后8500转（离心力在5500g）下离心25min，最后用1ml 0.3M NaCl的0.01M PBS进行溶解。然后用荧光测定，发现荧光量很小。所以，几乎链接DNA很少。 求问：这问题出在哪里？@崇明先生@jiagle |
回复此楼» 猜你喜欢
[武汉纺织大学]材料学院[姜伟团队名称]课题组-2026年硕士研究生调剂信息
已经有0人回复
-
中国科学院·过程工程研究所·招聘海内外高层次人才---过程所“百人计划”
已经有1人回复
-
有机高分子材料论文润色/翻译怎么收费?
已经有164人回复
-
中国科学院·过程工程研究所·招聘海内外高层次人才---过程所“百人计划”
已经有5人回复
-
2026考博自荐
已经有4人回复
-
温敏水凝胶收缩
已经有0人回复
-
PDMS膜在溶液中的离子透过率
已经有0人回复
-
攒人品 论文祈福
已经有139人回复
-
science advances的AAAS系统上返修
已经有0人回复
-
science advances的AAAS系统上返修问题
已经有2人回复
-
LDPE黑十字为什么那么大
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
2楼2016-06-23 15:21:58
3楼2016-06-23 18:33:53
4楼2016-06-24 19:21:31
更深的蓝
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 5254.5
- 散金: 109
- 红花: 12
- 帖子: 897
- 在线: 721.6小时
- 虫号: 522920
- 注册: 2008-03-12
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
5楼2016-06-26 11:42:12
6楼2016-06-27 17:17:34
7楼2016-06-27 17:18:07
更深的蓝
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 5254.5
- 散金: 109
- 红花: 12
- 帖子: 897
- 在线: 721.6小时
- 虫号: 522920
- 注册: 2008-03-12
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
8楼2016-06-28 12:42:54
9楼2016-06-29 01:04:44
更深的蓝
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 5254.5
- 散金: 109
- 红花: 12
- 帖子: 897
- 在线: 721.6小时
- 虫号: 522920
- 注册: 2008-03-12
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
10楼2016-06-29 15:26:40
