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luanmanedved

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于磷酸三脂酶(有机磷水解酶)表达纯化的问题

本人想表达纯化PTE(OPH)之后进行突变,但表达纯化阶段就出现问题。
公司合成基因,按照文献里的方式连接到PET-28a质粒上,表达后包涵体很多,纯化出的酶很少。同时也尝试了其他几种PET载体,而且优化了诱导条件,发现没有明显的提高?求助各位做过这方面实验的高手还有什么方式?更换其他载体么?
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biosci

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可以试试冷激载体,或者枯草个毕赤分泌表达

发自小木虫Android客户端
2楼2016-06-21 10:25:39
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luanmanedved

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2016-06-21 10:25:39
可以试试冷激载体,或者枯草个毕赤分泌表达

谢谢您的回答,枯草毕赤酵母有同事尝试过,对于PTE的表达效率没有数量级上的提高,就是相比较大肠杆菌省去了细胞破碎收集的工序。冷激载体倒是第一次听说,再了解一下相关内容。针对包涵体多最近有一篇文章讲的是利用有机试剂让酶重折叠,但不知道效果到底怎么样。另外,我目前打算用pMAL融合蛋白共表达的方式试试怎么样。
3楼2016-06-22 11:14:14
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