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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于磷酸三脂酶（有机磷水解酶）表达纯化的问题
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luanmanedved

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于磷酸三脂酶（有机磷水解酶）表达纯化的问题

本人想表达纯化PTE（OPH）之后进行突变，但表达纯化阶段就出现问题。
公司合成基因，按照文献里的方式连接到PET-28a质粒上，表达后包涵体很多，纯化出的酶很少。同时也尝试了其他几种PET载体，而且优化了诱导条件，发现没有明显的提高？求助各位做过这方面实验的高手还有什么方式？更换其他载体么？
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1楼 2016-06-21 09:55:32
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
可以试试冷激载体，或者枯草个毕赤分泌表达

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2楼2016-06-21 10:25:39
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luanmanedved

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2016-06-21 10:25:39
可以试试冷激载体，或者枯草个毕赤分泌表达

谢谢您的回答，枯草毕赤酵母有同事尝试过，对于PTE的表达效率没有数量级上的提高，就是相比较大肠杆菌省去了细胞破碎收集的工序。冷激载体倒是第一次听说，再了解一下相关内容。针对包涵体多最近有一篇文章讲的是利用有机试剂让酶重折叠，但不知道效果到底怎么样。另外，我目前打算用pMAL融合蛋白共表达的方式试试怎么样。
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3楼2016-06-22 11:14:14
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