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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 关于DNA连接载体与目的片段的比例是1:3到1:10的问题
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王平阳

金虫 (正式写手)

[求助] 关于DNA连接载体与目的片段的比例是1:3到1:10的问题 已有2人参与

在进行DNA连接的时候，常说载体与目的片段的比例是1:3到1:10，我想问的是这里所说的比例是质量比还是物质的量比？
例如：我有一组模板。经测定质量浓度大约1100ng/uL，换算成物质的量浓度大约0.2uM，目的片段物质的量浓度是10uM，换算成质量浓度大约是160ng/uL，请问这个要怎么配置比例啊？
求教各位大神！ @youlinglyw
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没有做不到，只有想不到！
1楼 2016-06-18 09:21:01
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张小蛋

新虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:04:23
说的是体积比，看你自己的条带亮度了，还有胶回收定容情况，一般载体要浓度低一点，我偏向于10:1，因为载体不管浓度多大，都会疯连，建议可以做一个梯度，比如1:1、2:1、3:1、10:1，然后混合到一管，我一般不会去测浓度，意义不大，祝好运~

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2楼2016-06-18 10:10:19
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virus510

禁虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:04:40
本帖内容被屏蔽
3楼2016-06-18 11:45:01
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
说的是体积比，我一般都是跑胶看一下载体与片段的亮度，根据亮度按比例加

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4楼2016-06-18 22:04:39
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王平阳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-06-18 10:10:19
说的是体积比，看你自己的条带亮度了，还有胶回收定容情况，一般载体要浓度低一点，我偏向于10:1，因为载体不管浓度多大，都会疯连，建议可以做一个梯度，比如1:1、2:1、3:1、10:1，然后混合到一管，我一般不会去测 ...

首先写你的解答，不过如果不管浓度只是按体积比加，那这个体积比不是没有意义了吗？如果是按电泳亮度，那就是和质量比一样啦？
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没有做不到，只有想不到！
5楼2016-06-18 22:35:24
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王平阳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by virus510 at 2016-06-18 11:45:01
物质的量之比，一般是载体少一些，目的片段多一些，这样连接成功率高，不至于挑菌的时候成功率高。

我个人觉得也应该是物质的量浓度，可是商业化的载体如pMD-18T载体标注的却是50ng/uL，意思就是按质量比了，所以有点蒙了
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没有做不到，只有想不到！
6楼2016-06-18 22:37:44
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王平阳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 娟恋幸福 at 2016-06-18 22:04:39
说的是体积比，我一般都是跑胶看一下载体与片段的亮度，根据亮度按比例加

电泳亮度比，那就是和质量比一样了？
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没有做不到，只有想不到！
7楼2016-06-18 22:38:52
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576789501

新虫 (小有名气)
物质的量比。

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8楼2016-06-19 00:04:08
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masterboyama

铁虫 (著名写手)
保证胶回收的时候，条带要足够的亮，可以做个浓缩，连接的时候多用些或全用上，连接成功后，留着也没用。

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9楼2016-06-19 06:41:37
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virus510

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王平阳: 金币+2, ★有帮助, 谢谢你的回答 2016-06-19 23:10:05
本帖内容被屏蔽
10楼2016-06-19 09:13:31
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