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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 我的质粒是不是被污染了？怎么解决？
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紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)

[求助] 我的质粒是不是被污染了？怎么解决？ 已有3人参与

提取质粒后跑胶有条带，酶切后什么都没有，我用质粒和新拆包装的buffer37度温育30分钟，没有加酶，条带也不见了，我的质粒是不是被污染了？怎么解决？

我的质粒是不是被污染了？怎么解决？


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1楼 2016-06-14 17:47:08
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zy349458068

新虫 (初入文坛)
请问你提取质粒怎么提的啊？是阳性菌的吗？
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6楼2016-06-17 22:03:18
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普通回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
孵育半小时是在干嘛

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2楼2016-06-14 17:55:21
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:03:51
你用了几微升的质粒做酶切呢？酶切后又是取了几微升电泳检测呢？会不会本来质粒浓度低，检测不到？另外，胶配的也不怎么样，所有条带都是模糊的。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-06-14 18:07:31
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紫玉涵轩

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-06-14 17:55:21
孵育半小时是在干嘛

就是怀疑有非特异性内切酶，然后想37度孵育看看是否在镁离子存在的情况下会发生降解

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4楼2016-06-14 18:40:31
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苏莫离

新虫 (初入文坛)
建议再仔细查看试剂说明书

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5楼2016-06-14 23:18:49
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masterboyama

铁虫 (著名写手)
胶没做好，酶切的时候多做几管，一起回收了。

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7楼2016-06-18 12:28:36
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎积极发帖回应 2016-06-19 07:52:00
你加入质粒后浓度变低，没法看出来，应该再目的条带的地方估计切胶回收纯化看看

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8楼2016-06-19 00:13:57
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个图上没有marker吧，会不会是质粒浓度太低了，我也遇到过这种情况，质粒浓度太低，酶切后就看不见条带。
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9楼2016-08-11 10:39:47
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博克多

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我刚学习，发现你的图跟我的差不了多少，但是我还不懂酶切怎么操作呢！！！！
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没有最好，只有更好
10楼2016-08-18 13:21:02
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