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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » trizol法采用纯化柱提取细胞中RNA的一些问题，
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jhyswqs

木虫 (正式写手)

[交流] trizol法采用纯化柱提取细胞中RNA的一些问题，

我们做RNA提取有一段时间，之前是选用试剂盒的方法提取RNA，现在我想用TRIZOL法尝试一下，步骤如下

加1ml trizol裂解细胞5min，转移到2ml离心管中，加200μl 氯仿震摇30s，4℃静置5min，12000rpm离心10min

取上清液等体积加入异丙醇到一新的2ml离心管中，室温静置10min（还有说-20℃放置2h），下一步我选择的是纯化柱过柱离心12000rpm，2min

加入700μl 75%异丙醇 离心12000rpm，2min

加入40μl RNase Free Water之后开始测RNA浓度

想请教一下这个过程RNA会降解吗？需要注意哪些问题？之前用试剂盒的方法加入巯基乙醇防止RNA降解，现在可以加入吗？在哪一步加合适
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1楼 2016-06-13 16:03:02
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jhyswqs

木虫 (正式写手)
大家有没有做过的呀，给点意见
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19楼2016-06-14 10:22:25
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moxiuyao

新虫 (初入文坛)
★
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
没做过这种

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21楼2016-06-14 14:21:03
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jhyswqs

木虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by moxiuyao at 2016-06-14 14:21:03
没做过这种

你好，那你做过RNA的提取吗？用的什么方法？
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23楼2016-06-15 10:54:33
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moxiuyao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们提取的是真菌的dsRNA

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24楼2016-06-15 15:37:48
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werq63

金虫 (著名写手)
戴口罩勤换手套，如果可以带一个医务人员用的一次性帽子。柱子需要rna专用的，吸头最好也是

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25楼2016-06-15 22:33:33
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玉玉玉玉珑

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
实验过程中带一次性口罩，手套，帽子进行实验，手是RNase的主要来源，实验过程勤换手套。实验过程保持在低温条件下进行，操作迅速，及时更换枪头。这些就能尽量减少RNase对RNA的降解

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26楼2016-06-16 00:46:13
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707607506

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
所有的耗材都用DEPC处理下

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27楼2016-06-16 13:53:05
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别踩我的菜

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室一直使用的是离心柱法提取细胞RNA，使用的是biog的一款，我看提取效果还是不错的额，同做实验室的小伙伴，可以一起交流提取的方法。
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28楼2018-11-28 14:07:13
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hydzp2楼
2016-06-13 16:28   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
fdzjm3楼
2016-06-13 16:35   回复  
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psylhh4楼
2016-06-13 16:36   回复  
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zhoushanqun5楼
2016-06-13 16:46   回复  
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skyish6楼
2016-06-13 16:46   回复  
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guanlianwu7楼
2016-06-13 16:50   回复  
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lhanglhang8楼
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假大空9楼
2016-06-13 16:54   回复  
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zhaoyan197810楼
2016-06-13 17:07   回复  
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shenrenren11楼
2016-06-13 17:22   回复  
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xhmaohan12楼
2016-06-13 17:37   回复  
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caledonian13楼
2016-06-13 18:57   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
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Jameskelly14楼
2016-06-13 19:22   回复  
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syhorchid15楼
2016-06-13 19:25   回复  
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tableman16楼
2016-06-14 00:32   回复  
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虎跃龙腾17楼
2016-06-14 00:33   回复  
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wudi201518楼
2016-06-14 08:35   回复  
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50477549020楼
2016-06-14 13:53   回复  
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博雅未名812822楼
2016-06-15 00:03   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
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