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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » trizol法采用纯化柱提取细胞中RNA的一些问题，
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jhyswqs

木虫 (正式写手)

[交流] trizol法采用纯化柱提取细胞中RNA的一些问题，

我们做RNA提取有一段时间，之前是选用试剂盒的方法提取RNA，现在我想用TRIZOL法尝试一下，步骤如下

加1ml trizol裂解细胞5min，转移到2ml离心管中，加200μl 氯仿震摇30s，4℃静置5min，12000rpm离心10min

取上清液等体积加入异丙醇到一新的2ml离心管中，室温静置10min（还有说-20℃放置2h），下一步我选择的是纯化柱过柱离心12000rpm，2min

加入700μl 75%异丙醇 离心12000rpm，2min

加入40μl RNase Free Water之后开始测RNA浓度

想请教一下这个过程RNA会降解吗？需要注意哪些问题？之前用试剂盒的方法加入巯基乙醇防止RNA降解，现在可以加入吗？在哪一步加合适
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1楼2016-06-13 16:03:02
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moxiuyao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们提取的是真菌的dsRNA

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24楼2016-06-15 15:37:48
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skyish6楼
2016-06-13 16:46   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
zhoushanqun5楼
2016-06-13 16:46   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
fdzjm3楼
2016-06-13 16:35   回复  
jhyswqs(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫IOS客户端
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