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guosuccess

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:基因全长扩增,后半段扩增出来了,前半段没有扩增出来。什么原因?

最近在扩增全长时,出现很怪的现象。希望大家指导一二:
1. 全长大约3.5kb。 扩增全长时,没有条带,换过Taq酶以及Pfu酶,模板换过肺癌细胞、肺正常组织、黑色瘤细胞等等。touch-down也做过。都没有条带。按文献报道,该基因在肺癌中存在着高表达。不知道什么原因?
2. 基于上面的现象,我把基因切断(中间正好有一个单一的限制性内切酶位点),分成两部分,分别扩增。结果下游部分顺利扩增出来,上游部分却没扩出来。不知道什么原因?
对了,扩增上游部分时,更换过下游引物,就是不出来。

麻烦大家帮吗分析分析。着急啊。
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guosuccess

新虫 (初入文坛)

需要拉全长,上游引物已固定,下游引物也换过。依然出不来。
郁闷ing!
5楼2016-06-21 12:16:20
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guosuccess

新虫 (初入文坛)

哪位大神帮帮忙吧。
2楼2016-06-13 10:54:03
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苏莫离

新虫 (初入文坛)

Pfu酶的dNTP里貌似不能有dutp还是什么来着(记不住了),否则DNA合成会终止,你仔细看看说明书吧

发自小木虫Android客户端
3楼2016-06-13 16:06:35
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wochong

新虫 (小有名气)


应该是引物的原因,你下游出来了上游没出来,,酶什么的应该是没有问题的,扩增的时候没有对照组么?
4楼2016-06-15 16:44:00
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