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[求助]
求助：基因全长扩增，后半段扩增出来了，前半段没有扩增出来。什么原因？
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最近在扩增全长时，出现很怪的现象。希望大家指导一二： 1. 全长大约3.5kb。 扩增全长时，没有条带，换过Taq酶以及Pfu酶，模板换过肺癌细胞、肺正常组织、黑色瘤细胞等等。touch-down也做过。都没有条带。按文献报道，该基因在肺癌中存在着高表达。不知道什么原因？ 2. 基于上面的现象，我把基因切断（中间正好有一个单一的限制性内切酶位点），分成两部分，分别扩增。结果下游部分顺利扩增出来，上游部分却没扩出来。不知道什么原因？ 对了，扩增上游部分时，更换过下游引物，就是不出来。 麻烦大家帮吗分析分析。着急啊。 |
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