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连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！ 已有16人参与
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连载体连不上一般都有什么原因？连了好几次了，最后验证都是空载，有些时候甚至没有菌长。 连接的体系是按照连接酶的说明书上计算的体系，所以浓度是按照最适合的浓度做的，温度用的是PCR仪控制，应该不会有问题(做的阳性对照长的满满的一平板）还能有什么原因？转化涂板之后12小时一般就长十几个不到的菌，都挑出来了，摇菌，提质粒做酶切验证，都是空载，提出来的质粒测的浓度都不低一百多吧， 发自小木虫Android客户端 |
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如果单酶切后连接，载体最好去磷酸化 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2016-06-12 06:09:03
3楼2016-06-12 06:27:44
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感觉最有可能就是载体双酶切没切开，或者只切了一刀，载体双酶切的体系对的吗？时间？内切酶是否失效？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-06-12 07:41:42
6楼2016-06-12 08:18:31
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空载体多说明没切开，下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照，如果长了菌落，就说明没完全切开，可以考虑过夜切 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-06-12 08:19:22
8楼2016-06-12 08:19:52
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9楼2016-06-12 08:22:27
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10楼2016-06-12 08:23:02