应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！
371/4返回列表1234下一页
查看: 2401  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qhiv6

新虫 (小有名气)

[交流] 连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！ 已有16人参与

连载体连不上一般都有什么原因？连了好几次了，最后验证都是空载，有些时候甚至没有菌长。
连接的体系是按照连接酶的说明书上计算的体系，所以浓度是按照最适合的浓度做的，温度用的是PCR仪控制，应该不会有问题(做的阳性对照长的满满的一平板）还能有什么原因？转化涂板之后12小时一般就长十几个不到的菌，都挑出来了，摇菌，提质粒做酶切验证，都是空载，提出来的质粒测的浓度都不低一百多吧，

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-06-11 23:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖 2016-06-12 06:57:16
如果单酶切后连接，载体最好去磷酸化

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-06-12 06:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 06:09:03
如果单酶切后连接，载体最好去磷酸化

酶切是双酶切

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2016-06-12 06:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
需要保证切彻底，如果有一个酶切位点切不开，也连不上。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-06-12 06:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

影连

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:39:59
感觉最有可能就是载体双酶切没切开，或者只切了一刀，载体双酶切的体系对的吗？时间？内切酶是否失效？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-06-12 07:41:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 影连 at 2016-06-12 07:41:42
感觉最有可能就是载体双酶切没切开，或者只切了一刀，载体双酶切的体系对的吗？时间？内切酶是否失效？

切的时候做了对照，可以切开，而且是双切

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-12 08:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:40:21
空载体多说明没切开，下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照，如果长了菌落，就说明没完全切开，可以考虑过夜切

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-06-12 08:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 06:49:17
需要保证切彻底，如果有一个酶切位点切不开，也连不上。

做对照了，可以切开，是双切的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-06-12 08:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)
怎么做的对照？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
9楼2016-06-12 08:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
两个酶切位点之间差多远？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-06-12 08:23:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qhiv6 的主题更新
371/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +3 15779376950 2026-03-01 3/150 2026-03-01 13:47 by ALZOOZL
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 0856化工专硕求调剂 +6 董boxing 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:45 by houyaoxu
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 272求调剂 +5 材紫有化 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:51 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料学调剂 +7 提神豆沙包 2026-02-28 9/450 2026-03-01 11:50 by 王伟要上岸啊
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +3 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 6/300 2026-03-01 11:50 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +5 好好好1233 2026-02-28 9/450 2026-03-01 10:59 by fengyu211
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考研] 291分工科求调剂 +7 science饿饿 2026-03-01 8/400 2026-03-01 10:43 by sunny81
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 272求调剂 +4 田智友 2026-02-28 4/200 2026-03-01 06:43 by 刘兵
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-02-28 6/300 2026-02-28 12:44 by 迷糊CCPs
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭