| 查看: 2414 | 回复: 36 | |||
[交流]
连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！ 已有16人参与
|
|
连载体连不上一般都有什么原因？连了好几次了，最后验证都是空载，有些时候甚至没有菌长。 连接的体系是按照连接酶的说明书上计算的体系，所以浓度是按照最适合的浓度做的，温度用的是PCR仪控制，应该不会有问题(做的阳性对照长的满满的一平板）还能有什么原因？转化涂板之后12小时一般就长十几个不到的菌，都挑出来了，摇菌，提质粒做酶切验证，都是空载，提出来的质粒测的浓度都不低一百多吧， 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有120人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 永远的童年《由中国青年报转载》
已经有4人回复
- EMBA课程60个经典小故事连载3(转的，大家分享~）
已经有1人回复
cxwu10016869
金虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 19786.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 2794
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 714398
- 注册: 2009-03-04
- 专业: 植物遗传学
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖 2016-06-12 06:57:16
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎积极回帖 2016-06-12 06:57:16
|
如果单酶切后连接，载体最好去磷酸化 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2016-06-12 06:09:03
3楼2016-06-12 06:27:44
cxwu10016869
金虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 19786.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 2794
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 714398
- 注册: 2009-03-04
- 专业: 植物遗传学
4楼2016-06-12 06:49:17
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:39:59
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:39:59
|
感觉最有可能就是载体双酶切没切开，或者只切了一刀，载体双酶切的体系对的吗？时间？内切酶是否失效？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-06-12 07:41:42
6楼2016-06-12 08:18:31
梅太奇阿拉干
木虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2137.8
- 红花: 5
- 帖子: 139
- 在线: 70.1小时
- 虫号: 2566697
- 注册: 2013-07-26
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:40:21
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-17 07:40:21
|
空载体多说明没切开，下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照，如果长了菌落，就说明没完全切开，可以考虑过夜切 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-06-12 08:19:22
8楼2016-06-12 08:19:52
cxwu10016869
金虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 19786.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 2794
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 714398
- 注册: 2009-03-04
- 专业: 植物遗传学
9楼2016-06-12 08:22:27
cxwu10016869
金虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 19786.7
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 2794
- 在线: 174.8小时
- 虫号: 714398
- 注册: 2009-03-04
- 专业: 植物遗传学
10楼2016-06-12 08:23:02
6