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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 08:22:27
怎么做的对照?

做的是一个连有一个已知长度的片段的(和这次连载体用的一样的载体),用这两个酶切的,切完跑电泳有两条带,而且小条带的长度也对,大条带就是那个载体了!

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11楼2016-06-12 09:31:41
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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 06:49:17
需要保证切彻底,如果有一个酶切位点切不开,也连不上。

这一个怎么能验证酶切的彻底不彻底?

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12楼2016-06-12 10:33:35
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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-12 08:19:22
空载体多说明没切开,下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照,如果长了菌落,就说明没完全切开,可以考虑过夜切

确实是过夜切的,因为第一次做的是切了三个小时,结果都是空载,所以就改成了过夜切

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13楼2016-06-12 10:34:53
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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-12 08:19:22
空载体多说明没切开,下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照,如果长了菌落,就说明没完全切开,可以考虑过夜切

嗯,下次做的时候带一个阴性对照!谢谢

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14楼2016-06-12 10:36:00
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shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
载体没问题的话,考虑一下目的基因,双酶切是否全部切开,如果都切开了,建议一次连接换一下连接比例

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15楼2016-06-12 14:19:40
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考研行者

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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16楼2016-06-12 16:25:11
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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 考研行者 at 2016-06-12 16:25:11
我也出现了同样的情况,你的解决了吗

没呢,等着连么

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17楼2016-06-12 16:44:04
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考研行者

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

18楼2016-06-12 16:45:34
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qhiv6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 考研行者 at 2016-06-12 16:45:34
做了好几次了,都没连上啊
...

嗯呐

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19楼2016-06-12 17:02:05
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20092290

木虫 (职业作家)

20楼2016-06-12 17:02:39
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