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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！
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qhiv6

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 08:22:27
怎么做的对照？

做的是一个连有一个已知长度的片段的（和这次连载体用的一样的载体），用这两个酶切的，切完跑电泳有两条带，而且小条带的长度也对，大条带就是那个载体了！

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11楼2016-06-12 09:31:41
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qhiv6

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 06:49:17
需要保证切彻底，如果有一个酶切位点切不开，也连不上。

这一个怎么能验证酶切的彻底不彻底？

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12楼2016-06-12 10:33:35
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qhiv6

新虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-12 08:19:22
空载体多说明没切开，下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照，如果长了菌落，就说明没完全切开，可以考虑过夜切

确实是过夜切的，因为第一次做的是切了三个小时，结果都是空载，所以就改成了过夜切

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13楼2016-06-12 10:34:53
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-06-12 08:19:22
空载体多说明没切开，下次转化的时候直接转化酶切产物作为阴性对照，如果长了菌落，就说明没完全切开，可以考虑过夜切

嗯，下次做的时候带一个阴性对照！谢谢

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14楼2016-06-12 10:36:00
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shx0743

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体没问题的话，考虑一下目的基因，双酶切是否全部切开，如果都切开了，建议一次连接换一下连接比例

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15楼2016-06-12 14:19:40
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考研行者

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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16楼2016-06-12 16:25:11
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 考研行者 at 2016-06-12 16:25:11
我也出现了同样的情况，你的解决了吗

没呢，等着连么

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17楼2016-06-12 16:44:04
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考研行者

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2016-06-12 16:45:34
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 考研行者 at 2016-06-12 16:45:34
做了好几次了，都没连上啊
...

嗯呐

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19楼2016-06-12 17:02:05
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20092290

木虫 (职业作家)
是不是自连了？

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20楼2016-06-12 17:02:39
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