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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连载体总是连不上！请直接看问题，谢谢！
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 20092290 at 2016-06-12 17:02:39
是不是自连了？

好像不是，双酶切怎么自连？

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21楼2016-06-12 17:04:13
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
出现空载说明没有完全切开。如果两个酶切位点隔得比较近，分开切比较好。还要看看酶切位点之间有没有重叠，如果有重叠的序列，注意切的顺序

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22楼2016-06-12 21:55:56
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-12 21:55:56
出现空载说明没有完全切开。如果两个酶切位点隔得比较近，分开切比较好。还要看看酶切位点之间有没有重叠，如果有重叠的序列，注意切的顺序

分开切就是切两次呗

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23楼2016-06-13 06:30:09
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zherty

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有可能片段太大，不好连

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24楼2016-06-13 07:46:21
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种直说结果不讲过程的求助贴，别人一般是给你解决不了的！

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25楼2016-06-13 07:59:38
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super_mm

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好还是做一下去磷酸化，有一丁点载体自连就很影响结果
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26楼2016-06-13 10:43:43
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苏莫离

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议加大目的基因的量至载体的量的三五倍以上尝试

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27楼2016-06-13 16:12:16
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qhiv6

新虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 小周 at 2016-06-13 07:59:38
这种直说结果不讲过程的求助贴，别人一般是给你解决不了的！

我想看一下大家都能提出来什么原因，我也不知道具体哪一步出问题了，前天又做了一次，连上了，谢谢！谢谢大家！

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28楼2016-06-13 18:01:31
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chaperonesy

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以尝试先连接T载体，再从T载体上切下来做连接，这样既能保证足够的浓度，而且从质粒上切比直接拿一支PCR产物切容易，成功的几率也大，连接T载体转化也容易成功。

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29楼2016-06-13 19:58:59
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star013

新虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们公司可以提供载体构建技术服务

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30楼2016-06-14 09:36:42
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