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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌P 酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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黄启秀

新虫 (正式写手)

[求助] 菌P 酶切 已有1人参与

菌P成功，且条带都非常好，可酶切不成功  条带不对，如图第一张是菌P的图  第二张是提质粒后酶切跑胶图，质粒大小9600多  连接片段400多  ，是小片段酶切看不清楚么，或是酶切条件有问题，还是连接不成功？

菌P  酶切


菌P  酶切-1


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1楼 2016-06-08 21:34:21
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苏莫离

新虫 (初入文坛)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-13 21:23:04
建议加大质粒的量尝试。近期也在做载体构建，我要连接的目的基因片段也是400多bp。第一次酶切后目的条带特别浅，然后分别加大质粒的量至二倍、三倍，三倍时得到了较理想的亮条带。顺便提一句，我提取的质粒浓度在300ng/ul左右，酶切反应体系为20ul，酶切过夜。

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7楼2016-06-13 15:54:43
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黄启秀

新虫 (正式写手)
菌P  酶切-2

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2楼2016-06-08 21:35:30
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黄启秀

新虫 (正式写手)
上图为酶切后跑胶图，  题目中第二张图放错了

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3楼2016-06-08 21:36:21
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
提质粒后有没有再做一次pcr验证呢？

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4楼2016-06-09 22:34:35
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黄启秀

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-06-09 22:34:35
提质粒后有没有再做一次pcr验证呢？

没有耶(>﹏<

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5楼2016-06-13 14:53:06
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contactljh

银虫 (小有名气)
第二图lane 2下面有一条浅带，你没看见?

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6楼2016-06-13 15:31:54
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黄启秀

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 苏莫离 at 2016-06-13 15:54:43
建议加大质粒的量尝试。近期也在做载体构建，我要连接的目的基因片段也是400多bp。第一次酶切后目的条带特别浅，然后分别加大质粒的量至二倍、三倍，三倍时得到了较理想的亮条带。顺便提一句，我提取的质粒浓度在30 ...

我的双酶切酶  一个是快酶（切20分钟）一个是慢酶（要切1-16小时） 我把两个加一起 20ul体系  切了大概两个半小时，  只加了快切酶的Buffer  请问这样切可以么？

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8楼2016-06-13 23:27:53
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黄启秀

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by contactljh at 2016-06-13 15:31:54
第二图lane 2下面有一条浅带，你没看见?

没有耶

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9楼2016-06-13 23:28:18
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黄启秀

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by contactljh at 2016-06-13 15:31:54
第二图lane 2下面有一条浅带，你没看见?

好像看到一点  可是片段大小也不对啊～

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10楼2016-06-13 23:29:20
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