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黄启秀

新虫 (正式写手)

[求助] 菌P 酶切 已有1人参与

菌P成功,且条带都非常好,可酶切不成功  条带不对,如图第一张是菌P的图  第二张是提质粒后酶切跑胶图,质粒大小9600多  连接片段400多  ,是小片段酶切看不清楚么,或是酶切条件有问题,还是连接不成功?

菌P  酶切


菌P  酶切-1


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苏莫离

新虫 (初入文坛)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-13 21:23:04
建议加大质粒的量尝试。近期也在做载体构建,我要连接的目的基因片段也是400多bp。第一次酶切后目的条带特别浅,然后分别加大质粒的量至二倍、三倍,三倍时得到了较理想的亮条带。顺便提一句,我提取的质粒浓度在300ng/ul左右,酶切反应体系为20ul,酶切过夜。

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7楼2016-06-13 15:54:43
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黄启秀

新虫 (正式写手)

2楼2016-06-08 21:35:30
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黄启秀

新虫 (正式写手)

上图为酶切后跑胶图,  题目中第二张图放错了

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3楼2016-06-08 21:36:21
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

提质粒后有没有再做一次pcr验证呢?

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4楼2016-06-09 22:34:35
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黄启秀

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-06-09 22:34:35
提质粒后有没有再做一次pcr验证呢?

没有耶(>﹏<

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5楼2016-06-13 14:53:06
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contactljh

银虫 (小有名气)

第二图lane 2下面有一条浅带,你没看见?

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6楼2016-06-13 15:31:54
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黄启秀

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 苏莫离 at 2016-06-13 15:54:43
建议加大质粒的量尝试。近期也在做载体构建,我要连接的目的基因片段也是400多bp。第一次酶切后目的条带特别浅,然后分别加大质粒的量至二倍、三倍,三倍时得到了较理想的亮条带。顺便提一句,我提取的质粒浓度在30 ...

我的双酶切酶  一个是快酶(切20分钟)一个是慢酶(要切1-16小时) 我把两个加一起 20ul体系  切了大概两个半小时,  只加了快切酶的Buffer  请问这样切可以么?

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8楼2016-06-13 23:27:53
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黄启秀

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by contactljh at 2016-06-13 15:31:54
第二图lane 2下面有一条浅带,你没看见?

没有耶

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9楼2016-06-13 23:28:18
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黄启秀

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by contactljh at 2016-06-13 15:31:54
第二图lane 2下面有一条浅带,你没看见?

好像看到一点  可是片段大小也不对啊~

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10楼2016-06-13 23:29:20
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