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prthefu

木虫 (著名写手)

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[求助] 诱导蛋白跑胶，这样的图怎么解？？？已有2人参与

重组蛋白跑SDS-PAGE，未诱导的作为对照，各自分离上清、沉淀后跑胶，为什么显示都有条带呢，而且诱导的上清、沉淀中都有目标条带。还有一个问题：为什么跑出来的那些小杂带也那么多，一条一条的。
下图中，已标明诱导和未诱导的上清、沉淀，目的条带用黑框圈出。
做蛋白经验丰富的各位，能否指导一下，这是怎么回事。
本人新手，望大家多多指教，跟我分享一些经验。万分感谢。

蛋白PAGE图.png

蛋白电泳图.png@hc-material@gyesang

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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything

1楼2016-06-08 10:59:24

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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by prthefu at 2016-07-04 13:38:57
加葡萄糖是什么意思，请指教...

常见的lac相关的启动子带有碳源抑制机理。
其抑制作用在源头上是利用培养细胞到达稳定期时，对葡萄糖会作为第一碳源的优先性：通常是当葡萄糖消耗完了才开始使用其他碳源。这个碳源的转换过程当然就要伴随着大量的转录调控机制，让细胞在葡萄糖将罄时激活其他碳源消耗通路。
这里的抑制作用是通过在不缺葡萄糖碳源的情况下环状-AMP浓度较低的现象来调控lac启动子的作用。环状AMP是的AMP（磷酸腺苷）的分子内脱水的产物，是重要的信号分子。环状AMP与Catabolite activator protein（CAP）蛋白结合可以选择性结合lac启动子前方的CAP结合位点，从而促进RNA聚合酶的转录作用。加入葡萄糖可以抑制这种促进作用，从而降低本底表达水平。
附：T7启动子系统也可以用这个技巧，是因为T7RNA聚合酶被克隆在lacUV5启动子下方，T7RNA聚合酶的表达也是受碳源调控的。

不知道这样解释清楚了吗