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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因克隆求助
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叶小虫10

新虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆求助 已有1人参与

用高保真酶克一段序列，前面两次跑出来序列很清楚，第一张为前面两次，但是连接转化菌液监测都没有目的条带，之后又用普通酶拉条带以及用高保真酶跑，但是就是跑不出原来的条带了，第二张是跑不出来的结果。能请牛人给点意见呗

基因克隆求助


基因克隆求助-1


@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-06-02 19:34:55
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胡建琴

新虫 (初入文坛)
有没有做加A反应，用高保真酶扩增的话，克隆前要做加A的。
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8楼2016-06-04 09:01:42
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tangbowen

新虫 (小有名气)
你用高保真酶扩增，连的什么载体

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2楼2016-06-02 20:06:26
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zjsy_xff

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:46:40
用高保真酶扩增一般没有a尾，楼主用的什么克隆载体。拉基因的模版是什么？第二次是否模板反复冻融有降解

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3楼2016-06-02 22:48:22
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:03
楼主纠结这个问题前，是要先确定你的克隆或者模板是否携带了你的目的基因。你克隆菌液做pcr检测，目的就是为了验证这个克隆是否正确么？如果是这个目的话，出现扩增不出来的情况很正常呀，毕竟会出现空载假阳性的。另一种可能就是菌液pcr准确度不高，你可以提质粒做pcr和酶切验证，如果还没有目的条带，那就证明你这个克隆子是错误的呀，出现扩增不出来也就属于正常现象了，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-06-02 23:17:11
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