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用高保真酶克一段序列，前面两次跑出来序列很清楚，第一张为前面两次，但是连接转化菌液监测都没有目的条带，之后又用普通酶拉条带以及用高保真酶跑，但是就是跑不出原来的条带了，第二张是跑不出来的结果。能请牛人给点意见呗  @biostar2009 发自小木虫IOS客户端 |
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tangbowen
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2楼2016-06-02 20:06:26
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:46:40
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用高保真酶扩增一般没有a尾，楼主用的什么克隆载体。拉基因的模版是什么？第二次是否模板反复冻融有降解 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-06-02 22:48:22
原海亮
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楼主纠结这个问题前，是要先确定你的克隆或者模板是否携带了你的目的基因。你克隆菌液做pcr检测，目的就是为了验证这个克隆是否正确么？如果是这个目的话，出现扩增不出来的情况很正常呀，毕竟会出现空载假阳性的。另一种可能就是菌液pcr准确度不高，你可以提质粒做pcr和酶切验证，如果还没有目的条带，那就证明你这个克隆子是错误的呀，出现扩增不出来也就属于正常现象了，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-02 23:17:11
5楼2016-06-03 10:53:28
6楼2016-06-03 10:54:15
7楼2016-06-03 10:55:32
8楼2016-06-04 09:01:42
ss2032
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9楼2016-06-23 20:26:25
原海亮
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:27
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:27
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你做菌液pcr用的是什么引物呢？特异性引物还是通用性引物，如果通用引物可以做一个对照，看看非特异性条带是不是在其他菌中也存在，另外可以用你目的条带特异性引物进行扩增检测。当然我还是认为菌液pcr结果仅供参考，你还是要依赖提质粒做酶切，和后面的测序分析才可以，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-06-23 20:42:23
