| 查看: 1394 | 回复: 10 | ||
[求助]
基因克隆求助 已有1人参与
|
用高保真酶克一段序列，前面两次跑出来序列很清楚，第一张为前面两次，但是连接转化菌液监测都没有目的条带，之后又用普通酶拉条带以及用高保真酶跑，但是就是跑不出原来的条带了，第二张是跑不出来的结果。能请牛人给点意见呗  @biostar2009 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有288人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
-
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展
已经有0人回复
-
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍
已经有0人回复
-
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
tangbowen
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1273.1
- 帖子: 281
- 在线: 12.3小时
- 虫号: 3437121
- 注册: 2014-09-23
- 性别: GG
- 专业: 植物化学保护
2楼2016-06-02 20:06:26
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:46:40
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:46:40
|
用高保真酶扩增一般没有a尾，楼主用的什么克隆载体。拉基因的模版是什么？第二次是否模板反复冻融有降解 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-06-02 22:48:22
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:03
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:03
|
楼主纠结这个问题前，是要先确定你的克隆或者模板是否携带了你的目的基因。你克隆菌液做pcr检测，目的就是为了验证这个克隆是否正确么？如果是这个目的话，出现扩增不出来的情况很正常呀，毕竟会出现空载假阳性的。另一种可能就是菌液pcr准确度不高，你可以提质粒做pcr和酶切验证，如果还没有目的条带，那就证明你这个克隆子是错误的呀，出现扩增不出来也就属于正常现象了，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-02 23:17:11
5楼2016-06-03 10:53:28
6楼2016-06-03 10:54:15
7楼2016-06-03 10:55:32
8楼2016-06-04 09:01:42
ss2032
木虫 (正式写手)
咸鱼
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 3166.3
- 红花: 3
- 帖子: 577
- 在线: 70.8小时
- 虫号: 3590774
- 注册: 2014-12-12
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
9楼2016-06-23 20:26:25
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:27
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-24 07:47:27
|
你做菌液pcr用的是什么引物呢？特异性引物还是通用性引物，如果通用引物可以做一个对照，看看非特异性条带是不是在其他菌中也存在，另外可以用你目的条带特异性引物进行扩增检测。当然我还是认为菌液pcr结果仅供参考，你还是要依赖提质粒做酶切，和后面的测序分析才可以，祝好！ 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-06-23 20:42:23