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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[交流] 蛋白质纯化已有6人参与

亲们,有木有做过蛋白质纯化的呀。我包涵体用曲拉通、脲变性、透析过之后,总有白色物质析出,有木有影响啊?
我的透析袋是14000的,目的蛋白50000的。
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by baima at 2016-06-03 17:06:41
你是梯度透析吗?比如说,我纯化的蛋白样品是含8M尿素,我先用4M尿素的透析液,再换2M,再换1M,最后0M。复性过程切记不要过快,而且最好低温进行。我们一般都是在4度搅拌透析的
...

我跟你的正好相反哎,我是0, 2M, 4M, 8M。分别收集沉淀,沉淀,沉淀,上清。
4度透析16h以上,换一次新透析液,再透析16h以上。  
就是透析之后,好多白色絮状物质,离心我检测了这些东西是蛋白。上清过柱子之后检测什么也没有
11楼2016-06-03 17:13:04
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super_mm

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少
2楼2016-06-02 14:58:23
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少

好的,我试试
3楼2016-06-02 21:21:14
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by super_mm at 2016-06-02 14:58:23
你是包涵体复性吗?透析去除变性剂吗?白色物质应该是未复性成功的蛋白吧,肯定有影响,析出越少越好啊,把复性后的上清测蛋白浓度和SDS-PAGE,看复性率多少

是包涵体复性,是为了去除变性剂,我的析出来好多啊。复性率很低怎么办?
4楼2016-06-03 10:30:31
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