24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

上官abc

金虫 (正式写手)

王下七武海

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1012.2
散金: 2
帖子: 332
在线: 105.1小时
虫号: 2433438
注册: 2013-04-24
性别: GG
专业: 植物学

[求助] 用了三种菌还是表达不出蛋白已有12人参与

蛋白质表达不出来。用的是pET30a载体，菌用的是BL21、C43和Transetta。目的基因A长度在2400bp左右，蛋白质分子量在93KDa左右，酶切位点为Kpn 1和Nde 1。重组的质粒导入DH5a后菌液PCR和T7验证成功。
400μL菌液加入50m LB培养基，摇到OD值0.4~0.6，取20mL作为对照，剩下的加入IPTG诱导，每隔2小时取样一次，取到第10小时。
蛋白电泳中条带都不是很深，表明大肠杆菌整体表达不高。最关键的是90KDa左右没有特异性条带。下图为BL21和C43蛋白电泳图。
我想请问下广大虫友，我的步骤有没有问题？问题出现在哪？我下一步该怎么进行？万分感谢！

图片1.png

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼 2016-05-31 17:19:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Cathering_w

新虫 (正式写手)

应助: 25 (小学生)
金币: 1231.4
红花: 7
帖子: 361
在线: 29.8小时
虫号: 1354508
注册: 2011-07-24
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

其实哪步不出结果都是比较正常的，放平心态摸索条件，建议:1考虑是否移码，看看起始密码子对不对，2更换质粒，有些组氨酸尾巴在前有的在后有的都有，3加甘油，有的时候是管用的，4看沉淀中有没，万一只有包涵体怎么办，5加个没连接目的基因的空菌，一致的表达条件，看看有没有差异，6你的蛋白直接大量表达纯化一次，只要表达就好，管它多少，耽误时间实验进程
祝好运

发自小木虫Android客户端