应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有谁做过反向PCR的，请教一个问题
141/2返回列表12下一页
查看: 1041  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 有谁做过反向PCR的，请教一个问题

请问染色酶切完以后的电泳条带是什么样的，
还有连接前要不要拿酚/氯仿抽提？我做了很久都没有扩增出来。
谢谢谢谢！！！！

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 10:21 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
在其位，谋其政，成其事
1楼 2008-11-02 19:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)
另外 请教一下大家都是如何扩增未知基因的
‘
赞一下 回复此楼
在其位，谋其政，成其事
2楼2008-11-02 19:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 15:50
我认为反向PCR是最简单的扩增侧翼基因序列的方法了。
酶切后是需要酚氯仿抽提的，但是我一般用PCR纯化试剂盒纯化。
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-11-02 23:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)
谢谢  但是有一点：  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ，在紫外下出现一大片连续的荧光，请问这个结果你们有没有遇到过?
赞一下 回复此楼
在其位，谋其政，成其事
4楼2008-11-03 08:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)
这个是正常现象。
回复此楼
5楼2008-11-03 20:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)
那你扩增出来的片断亮吗？我做出来的很淡的
赞一下 回复此楼
在其位，谋其政，成其事
6楼2008-11-04 15:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258

引用回帖:
Originally posted by wangxuan at 2008-11-3 08:53:
谢谢  但是有一点：  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ，在紫外下出现一大片连续的荧光，请问这个结果你们有没有遇到过?

这个很有可能是你酶和底物之间的量不成比例所致。
赞一下 回复此楼
7楼2008-11-05 14:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-8 15:50
从你的描述看，酶切彻底。
至于扩增基因，为什么用反向PCR，是扩启动子吗？
反向PCR的关键是模板DNA的连接问题，无法检测DNA是否连接，只能是看PCR的结果。而又不知道目的片段的长度，好像是行走在黑夜里，^_^。
祝你好运！
赞一下(10人) 回复此楼
8楼2008-11-05 17:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wangxuan at 11/4/08  15:21:
那你扩增出来的片断亮吗？我做出来的很淡的

那减少酶的用量是不是可以避免这一现象了呢？
赞一下 回复此楼
在其位，谋其政，成其事
9楼2008-11-05 17:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by njlf1258 at 11/5/08  14:43:


这个很有可能是你酶和底物之间的量不成比例所致。

那减少酶的用量是不是可以避免这一现象了呢？
赞一下 回复此楼
在其位，谋其政，成其事
10楼2008-11-05 17:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangxuan 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭