24小时热门版块排行榜    

查看: 1104  |  回复: 13
当前主题已经存档。

wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 有谁做过反向PCR的,请教一个问题

请问染色酶切完以后的电泳条带是什么样的,
还有连接前要不要拿酚/氯仿抽提?我做了很久都没有扩增出来。
谢谢谢谢!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 10:21 ]
回复此楼
在其位,谋其政,成其事
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

另外 请教一下大家都是如何扩增未知基因的
‘
在其位,谋其政,成其事
2楼2008-11-02 19:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)

★
amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 15:50
我认为反向PCR是最简单的扩增侧翼基因序列的方法了。
酶切后是需要酚氯仿抽提的,但是我一般用PCR纯化试剂盒纯化。
3楼2008-11-02 23:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

谢谢  但是有一点:  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ,在紫外下出现一大片连续的荧光,请问这个结果你们有没有遇到过?
在其位,谋其政,成其事
4楼2008-11-03 08:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)

这个是正常现象。
5楼2008-11-03 20:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

那你扩增出来的片断亮吗?我做出来的很淡的
在其位,谋其政,成其事
6楼2008-11-04 15:21:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258

引用回帖:
Originally posted by wangxuan at 2008-11-3 08:53:
谢谢  但是有一点:  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ,在紫外下出现一大片连续的荧光,请问这个结果你们有没有遇到过?

这个很有可能是你酶和底物之间的量不成比例所致。
7楼2008-11-05 14:43:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 10-8 15:50
从你的描述看,酶切彻底。
至于扩增基因,为什么用反向PCR,是扩启动子吗?
反向PCR的关键是模板DNA的连接问题,无法检测DNA是否连接,只能是看PCR的结果。而又不知道目的片段的长度,好像是行走在黑夜里,^_^。
祝你好运!
8楼2008-11-05 17:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by wangxuan at 11/4/08  15:21:
那你扩增出来的片断亮吗?我做出来的很淡的

那减少酶的用量是不是可以避免这一现象了呢?
在其位,谋其政,成其事
9楼2008-11-05 17:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by njlf1258 at 11/5/08  14:43:


这个很有可能是你酶和底物之间的量不成比例所致。

那减少酶的用量是不是可以避免这一现象了呢?
在其位,谋其政,成其事
10楼2008-11-05 17:56:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangxuan 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:40 by oxidpl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利,还能抢救一下吗? +4 13108017953 2026-09-21 4/200 2026-09-24 10:06 by kudofaye
[有机交流] 有机合成以后会不会被AI改变?做科研的虫友怎么看 +5 zapen 2026-09-20 8/400 2026-09-23 17:21 by tianxiaoxian
信息提示
请填处理意见