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wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 有谁做过反向PCR的,请教一个问题

请问染色酶切完以后的电泳条带是什么样的,
还有连接前要不要拿酚/氯仿抽提?我做了很久都没有扩增出来。
谢谢谢谢!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 10:21 ]
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在其位,谋其政,成其事
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wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by njlf1258 at 11/5/08  14:43:


这个很有可能是你酶和底物之间的量不成比例所致。

那减少酶的用量是不是可以避免这一现象了呢?
在其位,谋其政,成其事
10楼2008-11-05 17:56:28
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查看全部 14 个回答

wangxuan

木虫 (著名写手)

另外 请教一下大家都是如何扩增未知基因的
在其位,谋其政,成其事
2楼2008-11-02 19:33:52
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speculiar

银虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 15:50
我认为反向PCR是最简单的扩增侧翼基因序列的方法了。
酶切后是需要酚氯仿抽提的,但是我一般用PCR纯化试剂盒纯化。
3楼2008-11-02 23:00:23
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wangxuan

木虫 (著名写手)

谢谢  但是有一点:  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ,在紫外下出现一大片连续的荧光,请问这个结果你们有没有遇到过?
在其位,谋其政,成其事
4楼2008-11-03 08:53:29
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