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xincer

木虫 (小有名气)

[交流] 关于多重PCR

有关于多重PCR的问题想请教一下各位:
1.多重PCR中不同基因的扩增效率不同是否会影响结果的可信性?这是否是除了引物二聚体外影响多重PCR结果的最大因素?
2.如果是。引物的长短及Tm 值是不是应该要求一致;扩增产物长短是不是也应该要求一致?
3.如果扩增产物的长短一致,那该如何从电泳图分辨产物呢?
4.不同基因的初始量的不同会不会影响他们的扩增效率;或者说,不同基因初始量的不同导致的对原料的使用率不同,这会不会影响另一个基因的扩增效率?

第一次做多重PCR,这几个问题搞不懂。 设想是不是应该在多重PCR之前分别做不同基因的扩增效率验证?
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xincer

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by armigera at 2016-05-28 14:26:50
1. 理论上不同的扩增效率会影响结果,但都是一个反应体系,我们认为他们扩增效率一致。所以结果是具有可重复性的。2. 引物的tm值尽量一致,保证与目的基因结合的效率一致。但这只是理论值,实际情况要看实验情况,要 ...

谢谢老师,我还有一个问题。就是不同基因的初始量不同是否也会影响扩增效率?因为浓度高的基因会和浓度低的基因进行原料的竞争,浓度越高竞争越大这会影响结果吗?

发自小木虫Android客户端
10楼2016-05-28 16:33:23
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xincer

木虫 (小有名气)

5楼2016-05-27 12:45:40
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lemmontree

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不太懂啊,没做过多重pcr

发自小木虫Android客户端
7楼2016-05-27 23:04:57
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物TM要求一致的,长度不要求,你可以参考一下Qiagen的多通道PCR试剂盒说明书。里面有些参数可以参考。

发自小木虫Android客户端
核酸提取与Taqman诊断
8楼2016-05-28 13:44:34
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