| 查看: 3138 | 回复: 10 | |||
xincer木虫 (小有名气)
|
[交流]
关于多重PCR
|
|
有关于多重PCR的问题想请教一下各位： 1.多重PCR中不同基因的扩增效率不同是否会影响结果的可信性？这是否是除了引物二聚体外影响多重PCR结果的最大因素？ 2.如果是。引物的长短及Tm 值是不是应该要求一致；扩增产物长短是不是也应该要求一致？ 3.如果扩增产物的长短一致，那该如何从电泳图分辨产物呢？ 4.不同基因的初始量的不同会不会影响他们的扩增效率；或者说，不同基因初始量的不同导致的对原料的使用率不同，这会不会影响另一个基因的扩增效率？ 第一次做多重PCR，这几个问题搞不懂。 设想是不是应该在多重PCR之前分别做不同基因的扩增效率验证？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
★
xincer(金币+1): 谢谢参与
xincer(金币+1): 谢谢参与
| 顶 |
2楼2016-05-26 15:38:38
 本帖仅楼主可见 |
3楼2016-05-26 15:57:29
|
本帖仅楼主可见 |
4楼2016-05-26 16:13:57
xincer
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2571.2
- 散金: 14
- 红花: 2
- 帖子: 183
- 在线: 115.6小时
- 虫号: 3392206
- 注册: 2014-09-01
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
5楼2016-05-27 12:45:40
 |
6楼2016-05-27 13:24:07
7楼2016-05-27 23:04:57
8楼2016-05-28 13:44:34
armigera
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3429.6
- 散金: 15
- 红花: 20
- 帖子: 756
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 1975949
- 注册: 2012-09-05
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1. 理论上不同的扩增效率会影响结果，但都是一个反应体系，我们认为他们扩增效率一致。所以结果是具有可重复性的。2. 引物的tm值尽量一致，保证与目的基因结合的效率一致。但这只是理论值，实际情况要看实验情况，要摸条件。3. 只要延伸时间足够，扩增产物的长短没有影响，长短可以不一致。4. 只要多重都在指数期，两者不会有太多影响。不过往往是，一个平台期一个指数期没法比较，所以条件还要摸。 传统的跑电泳检测多重pcr的方法已经过时了，建议采用多重荧光定量pcr比较准确。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-05-28 14:26:50
xincer
木虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2571.2
- 散金: 14
- 红花: 2
- 帖子: 183
- 在线: 115.6小时
- 虫号: 3392206
- 注册: 2014-09-01
- 性别: GG
- 专业: 生化分析及生物传感
|
谢谢老师，我还有一个问题。就是不同基因的初始量不同是否也会影响扩增效率？因为浓度高的基因会和浓度低的基因进行原料的竞争，浓度越高竞争越大这会影响结果吗？ 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-05-28 16:33:23
投票: