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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落pcr
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心中的四月

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr 已有5人参与

大肠杆菌菌液PCR没有任何条带，提取质粒之后PCR有条带，这是为什么啊？

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1楼 2016-05-26 10:56:55
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

确实是菌落PCR的酶的保证性不用那么高的，因为使用高保真酶有时候反而会有杂带或是拖尾的现象产生，解释不清楚是什么原因，我们实验室现在做菌落PCR时，找准对应的载体所用的引物，用普通r taq 酶，。效果一直不错，且挑菌过程没有感觉那么困难
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12楼2016-06-01 14:13:56
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你什么都不说只说没有结果，让人怎么帮你分析，起码你把做的过程和程序设置什么的发出来也好
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2楼2016-05-26 13:15:58
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个PCR酶试下。一般菌落PCR酶都用保真性差的，这样容易P出条带来。然后再对这些阳性进行提质粒、酶切鉴定。
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3楼2016-05-26 21:00:56
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液pcr本身用于初筛比较方便，但是相对提质粒酶切的验证方式来说，后者要可靠很多，曾经也因为过菌液pcr没条带，就确定实验失败了，但后来经过酶切验证，是正确的。所以pcr验证时，可能你菌体浓度等原因会出现这样不确定结果，现在基本已经不做菌液pcr了，直接提质粒酶切，祝好！

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心中的四月
天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-05-26 22:52:31
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