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心中的四月

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落pcr 已有5人参与

大肠杆菌菌液PCR没有任何条带,提取质粒之后PCR有条带,这是为什么啊?

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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换个PCR酶试下。一般菌落PCR酶都用保真性差的,这样容易P出条带来。然后再对这些阳性进行提质粒、酶切鉴定。
3楼2016-05-26 21:00:56
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌液pcr本身用于初筛比较方便,但是相对提质粒酶切的验证方式来说,后者要可靠很多,曾经也因为过菌液pcr没条带,就确定实验失败了,但后来经过酶切验证,是正确的。所以pcr验证时,可能你菌体浓度等原因会出现这样不确定结果,现在基本已经不做菌液pcr了,直接提质粒酶切,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-05-26 22:52:31
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普通回帖

hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你什么都不说只说没有结果,让人怎么帮你分析,起码你把做的过程和程序设置什么的发出来也好
2楼2016-05-26 13:15:58
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心中的四月

新虫 (小有名气)

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-26 22:52:31
菌液pcr本身用于初筛比较方便,但是相对提质粒酶切的验证方式来说,后者要可靠很多,曾经也因为过菌液pcr没条带,就确定实验失败了,但后来经过酶切验证,是正确的。所以pcr验证时,可能你菌体浓度等原因会出现这样 ...

谢谢

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5楼2016-05-27 10:30:51
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张小蛋

新虫 (小有名气)

菌落PCR我们实验室现在也基本开始规避,成功率比较低,主要是挑菌量很难把握,容易导致p不出任何条带,可以用菌液pcr,别的实验室有在用,成功率挺高~祝成功

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6楼2016-05-30 15:04:40
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心中的四月

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-05-30 15:04:40
菌落PCR我们实验室现在也基本开始规避,成功率比较低,主要是挑菌量很难把握,容易导致p不出任何条带,可以用菌液pcr,别的实验室有在用,成功率挺高~祝成功

谢谢,菌液PCR什么条带也p不出,这是为什么啊?

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7楼2016-05-30 18:59:56
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 心中的四月 at 2016-05-30 18:59:56
谢谢,菌液PCR什么条带也p不出,这是为什么啊?
...

是不是引物有问题,或者酶

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8楼2016-05-31 00:29:18
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心中的四月

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by lishuaiguang at 2016-05-31 00:29:18
是不是引物有问题,或者酶
...

谢谢!

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9楼2016-05-31 15:35:51
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张小蛋

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 心中的四月 at 2016-05-30 18:59:56
谢谢,菌液PCR什么条带也p不出,这是为什么啊?
...

这个我也不是很清楚,我没有实际用过菌液pcr~不好意思~

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10楼2016-05-31 16:07:27
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