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叶小虫10

新虫 (小有名气)

[求助] 菌液检测 已有3人参与

我是括一个一千九百多bp的片段,我是用的高保真酶跑的,凝胶回收后检测条带可以,之后我用pEasy-Blunt zero 连接转化,之后挑取单菌落用原先的引物跑,但都是最底部的小片段,我将菌挑一部分到LB液体培养基中,摇了一段时间,菌液检测,什么都没有,我已经重复很多遍了,能想到的问题我都想到了,可是为什么啊,求助

菌液检测
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Liumengya

木虫 (正式写手)

下面的条带是引物二聚体,引物加多了,20微体系加0.5引物就够

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4楼2016-05-21 21:56:36
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

你确定你的连接转化没问题么,有别人用你的药品或者方法成功过么

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2楼2016-05-21 21:30:01
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Liumengya

木虫 (正式写手)

菌液pcr用的什么酶?是扩增片段用米的酶吗?建议你用载体的通用引物,pcr预变性15分钟,试试看

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3楼2016-05-21 21:54:54
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叶小虫10

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Liumengya at 2016-05-21 21:56:36
下面的条带是引物二聚体,引物加多了,20微体系加0.5引物就够

我后面五个加了0.5的引物

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5楼2016-05-21 22:09:20
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