版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3879)
>导师招生 (405)
>硕博家园 (247)
>虫友互识 (237)
>文献求助 (110)
>招聘信息布告栏 (98)
>考博 (89)
>博后之家 (39)
>休闲灌水 (27)
>基金申请 (21)
>论文投稿 (18)
>找工作 (16)
>公派出国 (15)
>有机交流 (14)
>考研 (13)
>教师之家 (12)

mechefy

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1346.3
散金: 3
帖子: 75
在线: 33.9小时
虫号: 3435817
注册: 2014-09-23
专业: 兽医免疫学

[求助] PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段

如图，我的片段大小5300bp左右，上下游分别是NcoI和SalI酶切位点，PCR扩增出目的片段连接pMD 19-T后挑了好多才挑到一个疑似阳性单菌落的测序，发现测序结果上游缺失了200bp多点，但是后面5100bp都是没问题的。重复了三次酶切，单酶切SalI是可以切出来的，但是双酶切和单酶切NcoI都做不出来（双酶切条带跟SalI单酶切一样大，NcoI单酶切后依然跟质粒一样大的条带），基本可以确定上游缺失了200bp多的片段。各位大神谁能分析分析什么原因？

PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段

xmc.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw

» 猜你喜欢

ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有295人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

浙江大学2006年分子生物学考博已经有8人回复

1楼 2016-05-18 22:13:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

mechefy

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1346.3
散金: 3
帖子: 75
在线: 33.9小时
虫号: 3435817
注册: 2014-09-23
专业: 兽医免疫学

酶切位点没了肯定没法继续后续试验了

2楼2016-05-18 22:16:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

mechefy

新虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 1346.3
散金: 3
帖子: 75
在线: 33.9小时
虫号: 3435817
注册: 2014-09-23
专业: 兽医免疫学

有没有谁知道原因呢

3楼2016-05-18 22:17:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 711.7
红花: 2
帖子: 65
在线: 60.7小时
虫号: 0
注册: 2014-09-01
性别: GG
专业: 植物生理与生化

本帖仅楼主可见

4楼2017-03-29 19:06:05

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

相关版块跳转我要订阅楼主 mechefy 的主题更新