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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段
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mechefy

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段

如图，我的片段大小5300bp左右，上下游分别是NcoI和SalI酶切位点，PCR扩增出目的片段连接pMD 19-T后挑了好多才挑到一个疑似阳性单菌落的测序，发现测序结果上游缺失了200bp多点，但是后面5100bp都是没问题的。重复了三次酶切，单酶切SalI是可以切出来的，但是双酶切和单酶切NcoI都做不出来（双酶切条带跟SalI单酶切一样大，NcoI单酶切后依然跟质粒一样大的条带），基本可以确定上游缺失了200bp多的片段。各位大神谁能分析分析什么原因？

PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段
xmc.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2016-05-18 22:13:39
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mechefy

新虫 (小有名气)
酶切位点没了肯定没法继续后续试验了
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2楼2016-05-18 22:16:34
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mechefy

新虫 (小有名气)
有没有谁知道原因呢
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3楼2016-05-18 22:17:10
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匿名

用户注销 (小有名气)
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4楼2017-03-29 19:06:05
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