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PCR产物连接T载体测序缺失了部分片段
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如图，我的片段大小5300bp左右，上下游分别是NcoI和SalI酶切位点，PCR扩增出目的片段连接pMD 19-T后挑了好多才挑到一个疑似阳性单菌落的测序，发现测序结果上游缺失了200bp多点，但是后面5100bp都是没问题的。重复了三次酶切，单酶切SalI是可以切出来的，但是双酶切和单酶切NcoI都做不出来（双酶切条带跟SalI单酶切一样大，NcoI单酶切后依然跟质粒一样大的条带），基本可以确定上游缺失了200bp多的片段。各位大神谁能分析分析什么原因？ xmc.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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