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lycpu

金虫 (小有名气)

[交流] 扩不出目的启动子 已有11人参与

模板DNA 1ul, dNTP 2ul,buffer 2ul, Ex-Taq酶0.2ul,??上下游引物都是0.5ul, dd水14ul.
PCR的反应条件是:预变性 94℃ 5min, 变性94℃ 30s, 退火 68℃ 45s, 延伸 72℃ 90s, 延伸72℃ 10min, 35个循环。一个月了都没扩出来,求助各位虫友解答。
Maker是DL5000的!

扩不出目的启动子


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sunlk

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
启动子区多是GC含量丰富区,普通的酶扩不出来的,你看看你的启动子区的GC含量
很给力
9楼2016-05-18 13:01:28
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查看全部 16 个回答

陈嘉毅

至尊木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
退火温度改变一下试试,最好做个温度梯度找到合适的退火温度,现在也看不出问题所在。

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哈哈哈哈哈哈!
2楼2016-05-17 13:54:58
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sloop112

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼2016-05-17 16:43:00
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lycpu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-17 16:43:00
引物设计问题,祝好运

我也觉得,但引物都是用Oligo和premier设计分析过的呢?

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4楼2016-05-17 18:45:07
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