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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩不出目的启动子
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lycpu

金虫 (小有名气)

[交流] 扩不出目的启动子 已有11人参与

模板DNA 1ul, dNTP 2ul，buffer 2ul, Ex-Taq酶0.2ul,??上下游引物都是0.5ul, dd水14ul.
PCR的反应条件是：预变性 94℃ 5min, 变性94℃ 30s, 退火 68℃ 45s, 延伸 72℃ 90s, 延伸72℃ 10min, 35个循环。一个月了都没扩出来，求助各位虫友解答。
Maker是DL5000的！

扩不出目的启动子


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1楼 2016-05-17 13:35:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sunlk

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
启动子区多是GC含量丰富区，普通的酶扩不出来的，你看看你的启动子区的GC含量
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很给力
9楼2016-05-18 13:01:28
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普通回帖

陈嘉毅

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度改变一下试试，最好做个温度梯度找到合适的退火温度，现在也看不出问题所在。

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哈哈哈哈哈哈！
2楼2016-05-17 13:54:58
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2016-05-17 16:43:00
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lycpu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-17 16:43:00
引物设计问题，祝好运

我也觉得，但引物都是用Oligo和premier设计分析过的呢？

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4楼2016-05-17 18:45:07
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lycpu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 陈嘉毅 at 2016-05-17 13:54:58
退火温度改变一下试试，最好做个温度梯度找到合适的退火温度，现在也看不出问题所在。

做过了，但还是扩不出来

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5楼2016-05-17 18:45:29
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
6楼2016-05-18 08:58:01
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sayen

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板用基因组而不是cDNA

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7楼2016-05-18 10:12:01
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Atoy2014

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换一下模版，再跑梯度试试，再不行，估计引物问题了

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8楼2016-05-18 10:54:43
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a314919473

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换酶，退火温度应该55-60吧，68度我觉得有点高。可以做个阳性，或者其他能扩出来的模板引物。
看看是不是体系中哪个试剂有问题。
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有你真好
10楼2016-05-18 13:38:20
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